Вред электрофорез: Противопоказания к физиотерапии

Содержание

вред и польза. Советы физиотерапевта. Новости. Первый канал

Каждый из нас трепыхается в невидимых сверхпрочных сетях и даже не подозревает об этом. Прогресс, одарив нас тьмой электроприборов, заставляет жить в условиях постоянного излучения.

Никто не берётся точно сказать, как это отражается на здоровье. Врачи уже заявляют об особой “электромагнитной аллергии” и предлагают тех, кто вынужден больше часа в день говорить по мобильному телефону, приравнять к работникам вредных производств.

Репортаж Ивана Прозорова

Технологический бум в отдельно взятой квартире. Микроволновая печь, пароварка, стиральная машина, утюг, увлажнитель воздуха, компьютер, принтер, телевизор.

За последние 15 лет дома наполнились техникой, город – новыми источниками излучений. Сейчас они везде, констатируют учёные: в квартирах, машинах, на улице и в метро. Любой электрический прибор создаёт электромагнитное поле. Чем больше потребляет энергии, тем мощнее излучение. Его влияние на организм человека – до сих пор непаханое поле для исследований.

Олег Григорьев, заместитель председателя Российского национального комитета по защите от неионизирующих излучений: “Это вопрос, который стоит на повестке дня: каким образом оценить условия воздействия, когда человек подвергается воздействию многочисленных источников в течение продолжительного времени?”

Реакцию организма на бытовой уровень излучения почти невозможно заметить, говорят врачи. Нужно пройти полное медицинское обследование, выявить все заболевания и только потом анализировать, что из этого действительно от облучения. Болезни проще обнаружить у профессионалов, которые работают на специфических производствах. На мощное поле организм реагирует быстрее: слабость, головные боли, проблемы с сердцем.

Андрей Бушманов, первый заместитель генерального директора Федерального медико-биологического центра им. А.И. Бурназяна ФМБА РФ: “Оно обладает способностью изменять вегетативную нервную систему, сердечно-сосудистую систему, нервную систему, иммунную систему организма. Снижая показатели этих систем, оно, естественно, создает определенный фон для развития других заболеваний”.

Как правило, так влияют сильные внешние источники. Например, линии электропередачи. Жители домов по улице Промышленная в Ульяновске окружены 20 высоковольтными линиями. Под проводами гуляют, рядом с ними живут. На жалобы на плохое самочувствие власти не реагируют. Наоборот, недавно хотели протянуть ещё одну ветку ЛЭП. Строительство удалось остановить только через суд.

Фаина Носова, жительница одного из домов: “Специалисты сказали, что не имеют права на таком близком расстоянии ставить, что тут вообще опасно для жизни”.

Ученые условно делят все источники на внешние, которые находятся за пределами квартиры и создают мощное поле, например, станции, передатчики и любые беспроводные сети, и внутренние – с ними происходит непосредственный контакт, например, бытовая техника. Но есть случай, который специалисты называют особым: он сочетает и то, и другое воздействие. Это мобильная связь.

За изучение излучения фантом “Юлечка” отвечает головой. Вкупе с аппаратурой это самая независимая экспертиза. В подземной лаборатории атмосфера, как в бункере. Показания приборов словно в открытом поле – никаких помех.

Антон Меркулов, старший научный сотрудник Федерального медико-биологического центра им. А.И. Бурназяна ФМБА РФ: “Большая часть энергии электромагнитного поля, которое создается сотовым телефоном, будет поглощаться головой человека. Порядка 40-60%”.

Учёные до сих пор спорят, как это влияет на мозг и сколько минут можно разговаривать без последствий. Ведь мобильниками пользуются даже дети и беременные женщины. Согласно таким исследованиям, больше половины телефонов не прошли проверку на соответствие санитарным нормам. Независимо от марки и цены.

Олег Григорьев, заместитель председателя Российского национального комитета по защите от неионизирующих излучений: “Всегда можно использовать систему “хендс-фри”, любую. Это принципиальное решение проблемы, принципиальное, когда разрывается динамическая связь “антенна-голова”.

“Полевая” проверка в квартире показала: электромагнитное поле есть. Самое сильное там, где неправильно заземлены приборы. Но с домашними заботами справиться проще. Принцип времени и расстояния – работать с техникой недолго и держаться от неё подальше. И ещё помнить, что стена или шкаф не защитят от излучения.

Антон Меркулов, старший научный сотрудник Федерального медико-биологического центра им. А.И. Бурназяна ФМБА РФ: “Находиться от источника, длительно находиться, располагать места ночного отдыха как минимум в 50-100 сантиметрах от постоянно действующих источников – таких, как холодильник, кондиционер и так далее”.

Совсем отказаться от техники вряд ли возможно. Да и не нужно, говорят специалисты. Пара простых правил безопасности – и излучать можно будет только радость.

Гость в студии – Ирина Рачек, врач-физиотерапевт

Ведущий: Однако электромагнитное излучение не только вредит, но и с успехом используется в исцелении от многих недугов. С разъяснениями у нас в студии врач-физиотерапевт высшей категории Ирина Рачик. Ирина Игоревна, добрый день.

Гость: Добрый день.

Ведущий: При каких болезнях помогает физиотерапия?

Гость: Физиотерапия помогает при заболеваниях ЛОР-органов; органы сердечно-сосудистой системы – это сердце, сосуды периферические, регионарные, которые тоже поддаются очень хорошо физиолечению; далее идет желудочно-кишечный тракт; заболевания костно-суставной системы и заболевания кожи, что очень актуально, например, в детской практике. Это и различные детские дерматиты, экземы, нейродермиты, псориаз.

Ведущий: Есть ли противопоказания к физиотерапии?

Гость: Да, физиотерапия, конечно же, имеет ряд противопоказаний. К ним относятся злокачественные новообразования. Доброкачественные новообразования, склонные к росту. Миомы, фибромиомы, полипы. Системные заболевания крови. Декомпенсированные формы ишемической болезни сердца и органов кровообращения. Это артериальная гипертония выше второй стадии.

Ведущий: Детям с какого возраста можно делать физиотерапию?

Гость: Физиотерапию детям в настоящее время проводят уже в родильных домах. Например, для борьбы или для лечения омфалитов, это воспаление околопупочной ранки. А вообще детям физиотерапия показана. Они имеют те же самые показания, что и взрослые, но соответственно возрасту ребенку побирается специальная доза.

Ведущий: Сейчас в продаже очень много бытовых приборов для физиотерапии. Их безопасно, их эффективно использовать?

Гость: Они рассчитаны на широкого потребителя. То есть на наших пациентов. Единственное, на что надо обратить внимание, это на инструкцию, которая прилагается к каждому прибору, где четко определены время и место воздействия данным физическим фактором.

Ведущий: Какие-то опасности могут быть? Передозировки?

Гость: Конечно же, передозировки могут быть, если не следовать этим показаниям. И, вообще, каждый пациент имеет свои индивидуальные особенности. И, конечно же, лучше проконсультироваться с врачом перед тем, как начать лечение данным физическим фактором.

Ведущий: Какой тип подобных приборов бытовых для физиотерапии требует особого нашего внимания?

Гость: Я бы предостерегла от легкомысленного отношения к лазеротерапии. Мы, физиотерапевты, склонны к тому, чтобы процедуры лазеротерапии проводились под контролем врача.

Ведущий: Когда курс лечения физиотерапии проводит специалист, могут ли возникнуть какие-то побочные эффекты?

Гость: Да, конечно. Может быть индивидуальная непереносимость того или иного физического фактора. Это может быть ухудшение самочувствия, слабость, вялость, раздражительность.

Ведущий: Если ничего не болит, чувствуете себя хорошо, можно ли физиотерапию делать без показания, просто для профилактики?

Гость: Конечно, можно, ведь физиотерапия в переводе с греческого “физис” – “природа”, а “терапия” – это исцеление, то есть лечение естественными природными факторами среды. Что у нас ими являются? Это солнце, воздух и вода. Поэтому, конечно, в профилактических целях использовать эти факторы очень, очень даже можно и нужно. А вот все, что касается факторов, то есть лечение, которое мы с вами получаем от физиотерапевтических приборов, конечно же, должно назначаться врачом. И должно проводится под его контролем.

Ведущий: Большое спасибо, Ирина Игоревна. Врач-физиотерапевт высшей категории Ирина Радчик рассказала нам об особенностях лечения в буквальном смысле слова силами природы.

Советы физиотерапевта Ирины Радчик

Физиотерапия помогает при самых разных недугах. Но, как правило, это лишь часть необходимого лечения, ускоряющая выздоровление.

В острой стадии болезни такие меры не помогут, даже противопоказаны. Также запрет на посещение кабинета со световыми, тепловыми и прочими приборами налагают некоторые хронические хвори.

Подобного рода лечением в домашних условиях лучше не увлекаться. Из числа бытовых медицинских агрегатов наибольшую угрозу таят те, что воздействуют лазером.

К тому же, при физиотерапии иногда возникают неприятные побочные эффекты. Заметить надвигающуюся опасность и правильно на неё среагировать может только специалист.

Отделение медицинской реабилитации

Отделение медицинской реабилитации

Физиотерапия сегодня является одним из наиболее востребованных и популярных видов лечения. Свет и воздух, вода и тепло, электрический ток, магнитное поле, лазер, ультрафиолетовое излучение и различные виды массажа становятся верными помощниками в борьбе с недугами.

Главное преимущество физиотерапии перед другими методами лечения — ее высокая эффективность и сравнительная безопасность. Физиотерапевтические методы лечения не только не требуют применения медикаментозных препаратов, зачастую наносящих вред организму, но и позволяют сократить прием лекарств в разы за счет повышения чувствительности организма к лечебным свойствам медикаментов. Физиотерапия, как правило, не вызывает аллергии, не оказывает токсического воздействия на органы и ткани пациента, позволяет свести к минимуму неприятные последствия болезни, является профилактикой для многих болезней.

Физиолечение устраняет последствия перенесенных травм, улучшает функциональное состояние опорно-двигательного аппарата, способствует общему укреплению организма. Физиотерапевтические процедуры оптимизируют качество жизни, являются важной составной частью в комплексном лечении целого ряда разных заболеваний, повышают работоспособность, побеждают хроническую усталость. Новейшие методики и современное оборудование ведущих российских и зарубежных производителей позволяют сделать это максимально безопасно, комфортно и эффективно. Направление в физиоотделение дают врачи-специалисты.

Все процедуры в нашем отделении выполняются после консультации врача-физиотерапевта. Физиолечение применяется при следующих заболеваниях:

– заболеваний периферической нервной системы,
– после перенесенных ОНМК,
– заболеваний опорно-двигательного аппарата,
– травм,
– хирургической патологии ( ран, трофических язв, ХВН),
– заболеваний органов дыхания ( после перенесенной пневмонии, бронхитов)

– ЛОР патологии ( отиты, синуситы, тугоухость, тонзиллит),
– урологии (простатиты),
– гинекология (воспалительные заболевания женских половых органов, лактостаз),
– инфекционных болезнях ( опоясывающий лишай, рожистое воспаление),
– офтальмологии ( ячмень).

Физиотерапевтическое лечение в нашем отделении представлено всеми видами физиотерапевтического воздействия:

– магнитотерапия,
– электролечение ( ДДТ, СМТ, интерферентоки, ЧЭНС, гальванизация, электрофорез),
– токи высокой частоты ( УВЧ, СВЧ,ДМВ, дарсонваль).
– светолечение( УФО и ОКУФ),
– лазеротерапия,
-ультразвуковая терапия,
– массаж ручной и массажная кушетка

Иглорефлексотерапия:

-классическая корпоральная;
-аурикулярная;
-медикаментозная.

Массаж:

-классический;
-сегментарный;
-точечный массаж;
-массажная кушетка.

Лечебная физкультура

Курсы лечения длятся от 5 до 10 процедур ежедневно или через день. При грамотном профессиональном применении физиотерапевтического лечения, можно в полной мере исправлять многие функциональные расстройства, успешно бороться с болезнями, повышать жизненный тонус организма и сохранять работоспособность до глубокой старости.


Физиотерапия при анкилозирующем спондилите | Cochrane

Насколько эффективна физиотерапия при лечении анкилозирующего спондилита и насколько она безопасна?
Для ответа на этот вопрос ученые, работающие с группой Кокрейновских обзоров по костно-мышечным заболеваниям, нашли и проанализировали 11 исследований, в которых участвовало более 700 человек с анкилозирующим спондилитом (АС). В исследованиях сравнивали людей, которые делали упражнения дома, занимались групповыми физическими упражнениями, ходили на спа-процедуры или бальнеотерапию, выполняли различные программы упражнений или вообще не проходили курс лечения. Эти исследования предоставляют лучшие доказательства, которые мы имеем на сегодняшний день.

Что такое анкилозирующий спондилит и как может помочь физиотерапия?
АС – тип артрита, который наиболее часто поражает суставы и связки позвоночника, и приводит к болевым ощущениям, скованности и инвалидности различной степени. Физиотерапия является важным видом лечения для поддержания или улучшения движения позвоночника, улучшения физической формы и уменьшения боли.

Насколько эффективна физиотерапия?
В четырех исследованиях сравнивали индивидуальные или контролируемые упражнения с отсутствием терапии вообще. Выяснилось, что как индивидуальные, так и контролируемые программы упражнений улучшают движение позвоночника больше, чем отсутствие терапии. Программы упражнений выполнялись в течение двух-шести месяцев.

В трех исследованиях сравнивали домашние упражнения с групповыми упражнениями, которые проводились под наблюдением. Выяснилось, что групповые упражнения улучшают движение позвоночника и общее самочувствие, но не улучшают собственную оценку физического состояния пациента больше, чем домашние упражнения. Упражнения выполнялись от трех недель до девяти месяцев и включали упражнения на укрепление, аэробные упражнения, гидротерапию, спортивные занятия и растяжку.
В одном исследовании сравнивались две группы, выполнявшие еженедельные групповые упражнения в течение 10 месяцев, но одна из групп также была направлена в спа-комплекс для прохождения трехнедельной физиотерапии. Спа-терапия плюс еженедельные групповые упражнения уменьшают боль и улучшают общее самочувствие больше, чем просто еженедельные групповые упражнения. В одном исследовании сравнивали бальнеотерапию и ежедневные упражнения с выполнением только ежедневных упражнений, а в другом – бальнеотерапию с лечением пресной водой. В обоих исследованиях наблюдались улучшения после лечения нескольких исходов, но существенных различий между группами не было обнаружено. В одном исследовании четырехмесячная экспериментальная программа упражнений сравнивалась с традиционной программой. Самочувствие пациентов в обеих группах улучшилось, но у экспериментальной группы улучшились подвижность позвоночника и физическое состояние больше, чем у группы, выполнявшей традиционные упражнения.

Приносит ли вред пациентам физиотерапия?
В исследованиях не сообщалось о вреде для пациентов.

В чем суть?
Физиотерапия или упражнения полезны для людей с анкилозирующим спондилитом.

Существуют доказательства “серебряного” уровня (www.cochranemsk.org), что программы упражнений, выполняемые на дому или под наблюдением, эффективнее, чем отсутствие упражнений вообще, и это улучшает подвижность и физическое состояние пациента. Групповые упражнения эффективнее, чем домашние, они улучшают подвижность и общее самочувствие. Добавление нескольких недель занятий в спа-комплексе к еженедельным групповым упражнениям эффективнее, чем просто еженедельные групповые упражнения. Бальнеотерапия в дополнение к программе упражнений не показала дополнительного эффекта, также она не показала эффекта и в сравнении с лечением пресной водой. Экспериментальная программа упражнений показала большее улучшение подвижности и физического состояния, чем традиционные упражнения, но различия между группами не были статистически значимыми. Нам все еще нужна дополнительная информация о различных типах физиотерапии и физических упражнений, а также о том, как долго, насколько интенсивно и насколько часто физиотерапия должна проводиться для максимального улучшения.

Птоз лечение


Птоз – это опущение верхнего века с полным или частичным перекрыванием глаза.

В результате возникает эстетический дефект и дискомфорт ввиду ухудшения зрения.

Виды птоза

Существует два вида птоза верхнего века: приобретенный и врожденный. Приобретенный птоз может проявиться по следующим причинам:

  1. Миогенное нарушение или утомляемость мышц.

  2. Паралич глазодвигательного нерва приводит к нейрогеннному птозу. Может быть симптомом инсульта, ущемления шейного нерва, инфекцией или нейропатии.

  3. Возрастные факторы или изменения, вызванные травмами, часто приводят к потере эластичности мышц.

  4. Рубцы, вызванные травмами, и сокращение длины мышц приводят к возникновению механического птоза.

  5. Наличие складок кожи приводит к визуальному (ложному) опущению верхнего века.

  6. Возрастные изменения и неудачные пластические операции приводят к апоневротическому птозу. С возрастом также может возникнуть гравитационный птоз.

Неврологические и генетические причины могут стать причиной врожденного птоза. Это обусловливается укороченностью или слабостью мышц глаз у младенца. Иногда птоз развивается в результате родовых или внутриутробных травм.

Патология может быть односторонней или двухсторонней. Таким образом, может быть левосторонний, правосторонний или двухсторонний птоз. У новорожденных, как правило, поражаются сразу оба глаза. Разделяют заболевание по степени опущения:

  1. Первая степень – частичное опущение, при котором перекрыто меньше трети зрачка.

  2. Вторая степень – опущение века достигает центра зрачка.

  3. Третья степень – зрачок перекрыт полностью.

Главным симптомом независимо от возраста является опущение века. Это мешает человеку хорошо видеть, поэтому приходится наклонять голову или приподнимать веко пальцем.

Особенности и симптомы птоза у детей

Диагностировать патологию у младенца достаточно сложно из-за того, что большую часть времени он спит. В данном случае нужно обратить внимание на частое моргание и раздражение глаз. Для детей старшего возраста характерными симптомами станут:

  1. Запрокидывание головы при чтении или письме.

  2. Сокращение лицевых мышц с одной стороны.

  3. Жалобы на раздражение или утомляемость глаз.

При врожденном птозе сопутствующими нарушениями могут стать эпиканту, косоглазие, снижение зрения или повреждение роговой оболочки.

Диагностика

Простого осмотра у врача обычно достаточно для диагностирования этой болезни. При этом для назначения лечения врач может назначить дополнительное обследование.

  1. Тест остроты и полей зрения.

  2. Проверка внутриглазного давления.

  3. Осмотр состояния глазного дна.

  4. Биомкроскопия.

  5. КТ и МРТ головного мозга.

Методы лечения птоза век

  1. Операция. Это единственный вариант, если речь идет о врожденном птозе век. Оперативное вмешательство позволяет укоротить мышцы, поднимающие веки. Метод позволяет устранить частичное и полное опущение, очень эффективен. Шрамов у ребенка не остается, что важно с эстетической точки зрения. Взрослым после операции необходимо провести блефаропластику. Врач, помимо коррекции, удаляет жировые ткани и обвисшую кожу, что позволяет устранить не только птоз, но также косметические изъяны.

  2. Физиотерапия. Для лечения птоза век используется электрофорез, УВЧ, массаж, гимнастика, миостимуляция мышц и ряд других способов. При этом врач должен обратить внимание на причины возникновения дефекта. Если ответ на терапию не последовал, назначается операция.

  3. Лечение медикаментами. При непроводимости нервных окончаний подобный подход может быть эффективен. Но успешность терапии во многом зависит от степени опущения и возможности лечения заболевания, приведшего к опущению века.

  4. Массаж и специальные упражнения. Массажные процедуры позволяют вернуть тонус мышцам. Благодаря стимуляции и движению они укрепляются. Подобный метод может быть полезен при потере тонуса в результате природных процессов старения в организме. Но важно выполнять назначенные лечащим врачом упражнения регулярно, иначе эффекта не будет.

 Важно понимать, что самостоятельное лечение невозможно и может нанести вред здоровью. Только своевременное обращение к врачу позволяет эффективно решить возникшую проблему, поэтому затягивать с этим не стоит. Если замечен птоз века у ребенка, необходимо обратится к врачу, ведь он может привести к амблиопии или косоглазию.

 

Электрофорез – метод, сочетающий действие на организм постоянного тока и вводимых с его помощью лекарственных средств. При этом фармацевтический препарат попадает через кожу непосредственно в болезненную область, минуя желудочно-кишечный тракт, без нарушения кожных покровов. Введение лекарственных средств в тело методом электрофореза – это самый безопасный способ лекарственной терапии. 

ЭЛФОР-ПРОФ разработан на базе новейших технологий и достижений цифровой электронной техники и предназначен для применения в физиотерапевтических кабинетах. 

АППАРАТ “ЭЛФОР-ПРОФ” может применяться для лечения и профилактики широко спектра заболеваний. Лекарственный электрофорез хорошо переносят люди разного возраста, в том числе дети, а также лица пожилого и старческого возраста. Лекарственный электрофорез не дает аллергических реакций и других побочных эффектов, характерных для лекарственной терапии. Поэтому особенно показано применение “ЭЛФОР-ПРОФ” людям, страдающим аллергией. 

АППАРАТ “ЭЛФОР-ПРОФ” используется для проведения процедур лекарственного электрофореза. Это сочетанное воздействие гальваническим током и лекарственным веществом. Гальванический ток обладает самостоятельным лечебным действием – умеренным обезболивающим, сосудорасширяющим, трофическим и противовоспалительным. В то же время он вызывает перемещение частиц лекарственного вещества с лечебных электродов в организм пациента. Молекулы лекарственного вещества распределяются по организму и оказывают присущее им лечебное действие. Чаще всего применяют электрофорез обезболивающих (новокаин, анальгин) и сосудорасширяющих (никотиновая кислота, нош па) лекарственных препаратов. 

В гинекологии ЭЛФОР-ПРОФ применяется при: невынашивании беременности, нарушениях менструального цикла, менструальном и климактерическом синдромах, бесплодии, токсикозе, генитальном инфантилизме, при болях, спаечном процессе, хроническом воспалении придатков и матки, послеоперационном периоде реабилитации. Снимает спазм сосудов и гладкой мускулатуры, что улучшает кровоснабжение тканей, рассасывание рубцов, спаек, контрактур, оказывает обезболивающий эффект.
   
При лечении хронических простатитов эффективность лечения повышается в десятки раз.

В косметологии ЭЛФОР-ПРОФ применяется при: заболеваниях кожи, всех видах себореи, сухой и увядающей коже, жирной, подверженной угревой сыпи коже, постугревых рубцах, всех видах аллопеции, розацеи, гиноидной липодистрофии (целлюлит). Улучшает трофику тканей, удаляет продукты метаболизма из патологических очагов, ликвидирует инфильтрацию при воспалительных процессах, стимулирует размягчение и рассасывание рубцов, регенерацию поврежденных тканей, нормализует нарушенные функции, повышает защитную функцию кожи, белковый и углеводный обмен.

Есть противопоказания. Посоветуйтесь с врачом. Возможен вред здоровью.

Лекарственный электрофорез (гальванизация) (1 процедура, 1 поле)

22.01.2022

Личный кабинет пациента

Возможности личного кабинета пациента для записи на прием, отмены и переноса текущих записей к врачу, оплаты приема. Доступна авторизация пациентов через Госуслуги.

22.01.2022

Диалоги с детским стоматологом

Ответы на вопросы родителей: обсуждаем режим чистки зубов ребенком, выбор паст, лечение молочных зубов и исправление прикуса в раннем возрасте c Горячевой Д.В.

11.01.2022

Отличие КТ и МРТ исследований

Визуально КТ и МРТ-аппараты очень похожи, однако помимо разного принципа действия, эти исследования преследуют и разные цели, в зависимости от области сканирования и характера заболевания.

10.01.2022

Входим в рабочий режим после праздников

Праздничные дни прошли незаметно и перед каждым встаёт непростая задача: возвращение к рабочим будням. Сделать это намного проще чем кажется, если следовать ряду рекомендаций.

27.12.2021

График работы на новогодние праздники

Дорогие пациенты, мы поздравляем Вас с наступающим Новым Годом и Рождеством! В новогодние праздники филиалы Семейной Поликлиники продолжают работу с некоторыми изменениями.

26.12.2021

Хороший холестерин против плохого

В преддверии новогоднего застолья разбираем разницу хорошего холестерина и плохого и какие продукты можно включить на новогодний стол без вреда для здоровья.

07.12.2021

Когда нужна биопсия щитовидной железы?

Яушев Вадим Николаевич (врач-онколог, врач ультразвуковой диагностики, к.м.н.) рассказывает о том, на что врачи в первую очередь обращают внимание при направлении пациента на биопсию щитовидной железы.


Электрофорез в агарозном геле — обзор

Примечания к электрофорезу

Мы используем электрофорез для разделения нуклеиновых кислот или белков по размеру и/или заряду, в зависимости от того, что мы добавили в наши растворы (больше проблем с SDS-PAGE; см. главу 7). По сути, при гель-электрофорезе вы помещаете свои образцы в гелевую матрицу, и ваши отрицательно заряженные нуклеиновые кислоты (отрицательно заряженные из-за их фосфатной «основы») отталкиваются от отрицательного полюса ваших электродов к положительному полюсу на другом конце. гель.Более крупным РНК и ДНК (и белкам в SDS-PAGE) труднее перемещаться через гелевую матрицу, поэтому вы можете разделить РНК/ДНК/белки по размеру. Кроме того, это единственный способ проверить результаты конечной ПЦР (см. раздел ПЦР в Главе 4). По моему опыту, работа с гелем для электрофореза — это баланс между эффективностью и красотой: работа с гелем при более высоком напряжении будет быстрее перемещать образцы по гелю, но полученные полосы с большей вероятностью будут размыты (и если вы установите достаточно высокое напряжение, вы расплавите гель и разрушите всю свою тяжелую работу).Запустите гели при более низком напряжении, и вы получите более красивую картинку, но вам нужно подождать.

У меня есть опыт работы с тремя типами гель-электрофореза: электрофорез в агарозном геле, электрофорез в денатурирующем (формальдегидном) геле и электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE). Агарозные гели дешевы и могут использоваться для проверки стабильности РНК или ДНК. Денатурирующий гель-электрофорез можно использовать с РНК для нозерн-блоттинга, но в большинстве случаев в этом нет необходимости, если вашей целью является исследование стабильности РНК, которую можно исследовать с помощью электрофореза в агарозном геле.Хотя можно приготовить растворы без РНКазы для электрофореза в агарозном геле, я считаю, что это необходимо только для загрузочного буфера и воды, но не для геля или буфера. Растворы, не содержащие РНКазы, необходимы, если кто-то решил провести нозерн-блоты, которые не обсуждаются в этой книге. SDS-PAGE наиболее полезен для разделения белков и поэтому обсуждается в главе 7.

При электрофорезе в агарозном геле используется один из двух буферов: трис-ацетат-ЭДТА (ТАЭ) или трис-борат-ЭДТА (ТВЕ). TBE имеет более высокую буферную емкость, чем TAE.Компоненты буфера TBE осаждаются из раствора при хранении в более высоких концентрациях (например, 10-кратный раствор), поэтому я сохраняю 0,5-кратный запас и избегаю проблем с осаждением и стабильностью.

Визуализация результатов электрофореза в агарозном геле обычно выполняется одним из двух способов: включение ДНК-связывающего флуорофора в раствор геля или сохранение этого флуорофора в буферном растворе, промывание им агарозного геля и использование этого раствора для многократного использования. гели. В обоих случаях вы будете использовать ультрафиолетовый свет, чтобы возбудить флуорофор и увидеть результаты эксперимента.Наиболее распространенным ДНК-связывающим флуорофором является бромид этидия (EtBr). EtBr токсичен, и у вашего местного совета по охране окружающей среды и безопасности есть рекомендации, как с ним обращаться; делать то, что они говорят вам делать. Другой распространенный флуорофор, который я использую, — это SYBR Safe™ 1 (Invitrogen). SYBR Safe™ лучше справляется с тестами на токсичность на лабораторных животных, чем EtBr, но употребление чего-либо, связывающего ДНК, не является хорошей идеей. По моему опыту, SYBR Safe™ со временем разлагается в свободном растворе, но не в хранимом 10000-кратном концентрате.Таким образом, я получаю стабильные результаты, добавляя SYBR Safe™ (или EtBr) в раствор геля после того, как он достаточно остынет, перед заливкой геля. Когда флуорофор свободен в растворе, необходимо инкубировать гели в течение более длительных периодов времени, чтобы получить эквивалентное окрашивание в повторно используемом растворе; однако, если вы исследуете гели на предмет флуоресценции, то вы не сможете сказать, вызвано ли отсутствие флуоресценции тем, что эксперимент не удался, вы недостаточно долго инкубировали в растворе или вам нужно приготовить свежий раствор флуорофора. .Кроме того, промывка в растворе флуорофора обычно требует промывки водой для уменьшения фонового шума, и вы можете оставить его в воде на такое время, чтобы смыть флуорофор. В целом, я думаю, что включение вашего флуорофора в гель — это правильный путь, и со временем вы будете использовать его меньше, если не будете менять раствор для окрашивания каждые пару дней.

Хорошей ссылкой для этого раздела является книга Кэти Баркер « На скамейке ». 2

Электрофорез в агарозном геле для анализа повреждения ДНК

‘) переменная голова = документ.getElementsByTagName(“голова”)[0] var script = document.createElement(“сценарий”) script.type = “текст/javascript” script.src = “https://buy.springer.com/assets/js/buybox-bundle-52d08dec1e.js” script.id = “ecommerce-scripts-” ​​+ метка времени head.appendChild (скрипт) var buybox = document.querySelector(“[data-id=id_”+ метка времени +”]”).parentNode ;[].slice.call(buybox.querySelectorAll(“.вариант-покупки”)).forEach(initCollapsibles) функция initCollapsibles(подписка, индекс) { var toggle = подписка.querySelector(“.цена-варианта-покупки”) подписка.classList.remove(“расширенный”) var form = подписка.querySelector(“.форма-варианта-покупки”) если (форма) { вар formAction = form.getAttribute(“действие”) документ.querySelector(“#ecommerce-scripts-” ​​+ timestamp).addEventListener(“load”, bindModal(form, formAction, timestamp, index), false) } var priceInfo = подписка.querySelector(“.Информация о цене”) var PurchaseOption = toggle.parentElement если (переключить && форма && priceInfo) { toggle.setAttribute(“роль”, “кнопка”) toggle.setAttribute(“tabindex”, “0”) переключать.addEventListener(“щелчок”, функция (событие) { var expand = toggle.getAttribute(“aria-expanded”) === “true” || ложный toggle.setAttribute(“aria-expanded”, !expanded) form.hidden = расширенный если (! расширено) { покупкаOption.classList.add(“расширенный”) } еще { покупкаOption.classList.удалить (“расширить”) } priceInfo.hidden = расширенный }, ложный) } } функция bindModal (форма, formAction, метка времени, индекс) { var weHasBrowserSupport = window.fetch && Array.from функция возврата () { var Buybox = EcommScripts ? EcommScripts.Buybox : ноль var Modal = EcommScripts ? EcommScripts.Модальный: ноль if (weHasBrowserSupport && Buybox && Modal) { var modalID = “ecomm-modal_” + метка времени + “_” + индекс var modal = новый модальный (modalID) modal.domEl.addEventListener («закрыть», закрыть) функция закрыть () { form.querySelector(“кнопка[тип=отправить]”).фокус() } вар корзинаURL = “/корзина” var cartModalURL = “/cart?messageOnly=1” форма.установить атрибут ( “действие”, formAction.replace(cartURL, cartModalURL) ) var formSubmit = Buybox.interceptFormSubmit( Buybox.fetchFormAction(окно.fetch), Buybox.triggerModalAfterAddToCartSuccess(модальный), функция () { форма.removeEventListener («отправить», formSubmit, false) форма.setAttribute( “действие”, formAction.replace(cartModalURL, cartURL) ) форма.отправить() } ) form.addEventListener (“отправить”, formSubmit, ложь) документ.body.appendChild(modal.domEl) } } } функция initKeyControls() { document.addEventListener (“нажатие клавиши”, функция (событие) { if (document.activeElement.classList.contains(“цена-варианта-покупки”) && (event.code === “Пробел” || event.code === “Enter”)) { если (document.activeElement) { мероприятие.предотвратить по умолчанию () документ.activeElement.click() } } }, ложный) } функция InitialStateOpen() { вар buyboxWidth = buybox.offsetWidth ;[].slice.call(buybox.querySelectorAll(“.опция покупки”)).forEach(функция (опция, индекс) { var toggle = option.querySelector(“.цена-варианта-покупки”) вар форма = вариант.querySelector(“.форма-варианта-покупки”) var priceInfo = option.querySelector(“.Информация о цене”) если (buyboxWidth > 480) { переключить.щелчок() } еще { если (индекс === 0) { переключить.щелчок() } еще { toggle.setAttribute («ария-расширенная», «ложь») форма.скрытый = “скрытый” priceInfo.hidden = “скрытый” } } }) } начальное состояниеОткрыть() если (window.buyboxInitialized) вернуть window.buyboxInitialized = истина initKeyControls() })()

Реагенты для электрофореза – Alfa Aesar

  • 1,4-диакрилоилпиперазин, реагент для электрофореза, 97%

  • 1,4-дитио-DL-треитол, 98%

  • 1,4-дитио-DL-треитол, электрофорез, 99%

  • 1,4-Дитиоэритрит, 98+%

  • 1,4-дитиоэритрит, чистота для электрофореза, 99%

  • (1-Гексадецил)триметиламмония бромид, 98%

  • 2-Амино-2-метил-1-пропанол, 95%, может прод.около 5% воды

  • 2-иминотиолана гидрохлорид

  • 2-Меркаптоэтанол, 98+%

  • 2-Меркаптоэтанол, чистота для электрофореза, 98+%

  • Акриламид (30%) Растворы


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Акриламид (40%) Растворы


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред – https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Акриламид, 99,5%, класс молекулярной биологии


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Акриламид/бисакриламид 19:1, порошок


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Акриламид/бисакриламид 29:1, порошок


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Акриламид/бисакриламид 37,5:1, порошок


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред – https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Раствор акриламида/бисакриламида (40%, 37,5:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Акриламид, чистота для электрофореза, 99+%


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • АГАРОЗА

  • Агароза D1-LE, класс молекулярной биологии

  • Агароза, класс электрофореза

  • Краситель для загрузки агарозного геля (6X, щелочной)

  • Краситель для загрузки агарозного геля (6X, на основе фиколла)

  • Краситель для загрузки агарозного геля (6X, на основе глицерина)

  • Краситель для загрузки агарозного геля (6X, на основе глицерина, без бромфенолового синего)

  • Краситель для загрузки агарозного геля (6X, на основе глицерина, без ксиленцианола FF)

  • Краситель для загрузки агарозного геля (6X, на основе сахарозы)

  • Агароза, генная технология класса

  • Агароза, высокая температура гелеобразования, реагент для молекулярной биологии

  • Агароза, высокая температура плавления, среднее разрешение

  • Агароза LE, класс молекулярной биологии, сверхчистая, Thermo Scientific

  • Агароза с низким содержанием ЭЭО

  • Агароза, низкая температура гелеобразования, реагент для молекулярной биологии

  • Агароза – Разделение ≥ 500 п.н., сертифицированная генетическая эффективность, класс молекулярной биологии, сверхчистая, Thermo Scientific

  • Хлорид аммония, 99.5% мин.

  • Пероксидисульфат аммония, 98%

  • Пероксидисульфат аммония, класс электрофореза

  • Персульфат аммония, ACS, 98+%, Ultrapure, Thermo Scientific

  • Сульфат аммония, 99.95% (мет.прим.)

  • Бензилдиметил-н-тетрадециламмония хлорид гидрат, 98%

  • Бетаин, раствор 5M, класс молекулярной биологии, сверхчистый, Thermo Scientific

  • Бицина, 98.5-101,5% (сухая основа), Ultrapure, Thermo Scientific

  • BICINE, класс для электрофореза, 99+%

  • БиоАкрил-П (30%, 19:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • БиоАкрил-П (30%, 29:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред – https://www.p65warnings.ca.gov/
  • БиоАкрил-П (30%, 37,5:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • БиоАкрил-П (30%, 39:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • БиоАкрил-П (40%, 19:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред – https://www.p65warnings.ca.gov/
  • БиоАкрил-П (40%, 29:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • БиоАкрил-П (40%, 39:1)


    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Рак и репродуктивный вред — https://www.p65warnings.ca.gov/
  • Поиск по более чем 200 ведущим изданиям в области биологических, экологических и экологических наук.


    BioOne Vista: зоология

    Мартовский выпуск BioOne Vista приурочен к 10-летию Мартовского Безумия Млекопитающих — турнира, моделирующего соревнование между животными.Благодаря творческому повествованию, подкрепленному научными исследованиями, МММ вдохновляет участников изучать зоологию. Ознакомьтесь с подборкой текущих статей, вдохновленных участниками конкурса 2022 года, в которых представлены исследования Acta Chiropterologica , African Zoology , Journal of Mammology , Journal of Vertebrate Biology , Journal of Zoo and Wildlife Medicine , , , Journal of Mammology , Исследование млекопитающих и многое другое.

    Прочитать коллекцию


    Прочтите наш информационный бюллетень за февраль 2022 г.

    Новости BioOne направлены на установление связей и содействие обмену информацией в нашем сообществе издателей, библиотекарей, авторов и читателей.С этой целью мы изменили его дизайн, чтобы более эффективно делиться как организационными моментами, так и важными исследованиями BioOne Complete. Мы приглашаем вас ознакомиться с рекомендуемым контентом, публикациями основных моментов, обновлениями нашей библиотеки и партнеров по сообществу и многим другим.

    Читайте последние новости от BioOne


    Лучшие и актуальные исследования, январь 2022 г.

    Мы рады поделиться подборкой лучших и популярных статей, опубликованных в журналах BioOne, которые охватывают все области биологических наук, наук об окружающей среде и экологии.Рекомендуемые журналы включают Journal of East African Natural History , Annales Zoologici , Journal of Ethnobiology , Ursus и другие.

    Откройте для себя наши лучшие и популярные статьи


    Архив сборника статей

    Посетите нашу страницу архива коллекции статей, чтобы узнать больше о лучших и актуальных исследованиях, BioOne Vista и специальных коллекциях с последними статьями в BioOne Complete.

    Нажмите здесь, чтобы увидеть больше коллекций.


    Электрофорез белков как инструмент прогнозирования осложнений у госпитализированных пациентов с COVID-19 – Полный текст

    В конце декабря 2019 г. произошла вспышка нового респираторного заболевания (COVID-19), вызванного новым коронавирусом SARS-CoV-2. началась в городе Ухань, провинция Хубэй, Китай, и быстро распространилась в значительном числе стран. Эпидемия была объявлена ​​Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) пандемией 12 марта 2020 года.SARS-CoV-2 продемонстрировал способность быстро распространяться, что приводит к значительным последствиям для систем здравоохранения и вызывает социальные потрясения.

    Недавно сообщалось о клинических и эпидемиологических особенностях пациентов с COVID-19, демонстрирующих, что инфекция SARS-CoV-2 может протекать бессимптомно в одних случаях или симптоматически в других. Симптоматика обычно начинается как легкая с лихорадки, усталости, сухого кашля и иногда одышки. У меньшинства пациентов внезапное появление тяжелых симптомов может развиться через 5-8 дней после начала заболевания, включая одышку, пневмонит, острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС) и полиорганную дисфункцию, что приводит к госпитализации в отделение интенсивной терапии (ОИТ) и высокой смертность.В некоторых случаях накопленные данные свидетельствуют о том, что тяжелые симптомы COVID-19 могут быть связаны с синдромом цитокинового шторма. По состоянию на 3 мая 2020 года вирус заразил 3 349 786 пациентов во всем мире, при этом более 238 600 человек погибли, чаще среди пожилых пациентов с сопутствующими заболеваниями.

    В связи с перегрузкой больниц и истощением ресурсов в условиях этой нарастающей пандемии (высокая потребность в кислороде, длительная вентиляция легких и даже экстракорпоральная мембранная оксигенация (ЭКМО), особенно для пациентов с острым ОРДС), существует острая необходимость повышения клинических навыков для предсказать из многих легких случаев те немногие, которые перейдут в критическую форму, что позволит более эффективно распределять ресурсы и клиническое ведение.

    В нескольких исследованиях крови пациентов были описаны признаки, которые в наибольшей степени предсказывали ОРДС. Эти исследования показали, что тяжелые случаи по сравнению с легкими имели: 1) более старший возраст; 2) аномалии при сканировании грудной клетки (КТ), такие как множественные пятнистые тени и матовое стекло; 3) органная и коагуляционная дисфункция с повышенным уровнем аланинаминотрансферазы (АЛТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), С-реактивного белка (СРБ), ферритина и Д-димера; 4) а также заметно более высокие уровни иммунологических характеристик, таких как ИЛ-2Р, ИЛ-6, ИЛ-10 и ФНО-α; 5), а абсолютное количество Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+ Т-клеток) заметно ниже почти во всех тяжелых случаях.Эти наблюдения позволяют предположить, что тяжесть и смертность могут быть связаны с вирусным системным гипервоспалением, вторичным по отношению к неспособности иммунного ответа контролировать инфекцию (как показано для других вирусов).

    В этом исследовании мы хотим охарактеризовать прогностическую эффективность профилей воспаления в сыворотке с помощью белкового электрофореза, связанную с клиническими, радиологическими и биологическими факторами риска ухудшения. Это проспективное обсервационное исследование, проведенное на пациентах, госпитализированных по поводу инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2.

    Выявление повреждений ДНК при разных уровнях чувствительности

    номинальные, а увеличение дозы рентгеновского излучения малоэффективно.

    Однако, если за стадией щелочного раскручивания (в NaOH/ЭДТА)

    следовал электрофорез в нейтральном буфере TBE

    (трис/борат/ЭДТА), линейная доза-

    сохранялась по крайней мере до 50 Гр, при этой дозе только 50% ДНК в хвосте

    . Есть два альтернативных объяснения

    более низкой чувствительности модифицированного анализа.Возможно, что некоторые участки повреждения, проявляющиеся в виде разрывов ДНК в условиях

    щелочного электрофореза, остаются неповрежденными

    при проведении электрофореза при нейтральном рН; или там

    может быть одинаковое количество разрывов, но по какой-то

    причине разрывы по-разному влияют на поведение

    ДНК в различных условиях электрофореза.

    Теперь мы исследовали полезность этого менее чувствительного кометного анализа как в животных, так и в растительных клетках, с различными агентами,

    повреждающими ДНК, и с выбором

    ферментов,

    специфичных для поражения, для выяснения

    различий в поведении ДНК.

    2 Материалы и методы

    2.1 Ферменты

    Эндонуклеаза III, формамидопиримидингликозилаза

    (FPG) и эндонуклеаза Т4 V были получены в лаборатории

    из сверхпродуцирующих плазмидных векторов. Минимальная очистка была необходима для удаления активности неспецифических нуклеаз

    . Они использовались здесь в концентрациях, установленных как оптимальные для обнаружения их основных субстратов,

    , т.е. окисленные пиримидины, 8-оксогуанин и циклобутан

    пиримидиновые димеры соответственно.Экзонуклеаза III была получена от Boehringer (Мангейм, Германия) и использовалась

    в концентрации 100 ЕД/мл в условиях, рекомендованных производителем

    .

    2.2 Подготовка клеток HeLa для анализа комет

    Клетки HeLa выращивали в пластиковых чашках Nunclon (Life

    Technologies, Пейсли, Великобритания) в среде Eagle©s Minimal Essential

    , содержащей 5% сыворотки плода теленка, 5% сыворотки новорожденного теленка

    сыворотка, пенициллин и стрептомицин. Их удаляли

    трипсином, разводили средой, центрифугировали, а осадок

    суспендировали в PBS для обработки метил-

    метансульфонатом (MMS; от Sigma, Poole, UK), менадионом

    (Sigma) или Ro19. -8022 (RO, подарок от Hoff-

    mann-LaRoche, Базель, Швейцария).Менадион

    присутствовал в течение 60 мин при 37

    o

    C. Обработка MMS проводилась

    15 мин при 37

    o

    C. Клетки с RO впоследствии помещали в чашку со льдом и облучали

    с видимым светом из

    галогенная лампа мощностью 1000 Вт в течение 2 мин. Обработанные клетки

    центрифугировали, промывали в PBS, снова центрифугировали и суспендировали в 1% агарозе с низкой температурой плавления (Life Technology

    gies) в концентрации 2×10

    5

    /мл.Две 85 мл аликвоты

    клеток в агарозе помещали на предметное стекло микроскопа

    (предварительно покрытое 1% агарозой и высушенное). Стеклянная крышка

    пластины (22×22 мм) были помещены на гели, которые

    позволили установить при 4

    o

    C.

    2.2.1 Щелочное раскручивание/щелочное

    электрофорез (А/А)

    клетки, встроенные в агарозу, были лизированы в течение 1 ч в 2,5 м

    NaCl, 0,1 MNA

    2

    EDTA, 10 MMTRIS-HCl, pH 10, 1% Triton

    x-100 при 4

    o

    С.Затем их трижды промывали ферментным буфером

    (0,1 MKCl, 0,5 мМNa

    2

    ЭДТА, 40 мМ

    HEPES-KOH, 0,2 мг/мл BSA, pH 8,0) и инкубировали в течение

    40004 мин при

    o

    C с эндонуклеазой III, FPG или эндонуклеазой V T4 в этом буфере или только с буфером. Затем предметные стекла помещали в 0,3 МNaOH, 1 мМNa

    2

    ЭДТА (pH приблизительно

    или 13) на 40 мин перед электрофорезом при 25 В

    (примерно 1 В/см поперек геля)

    мА в течение 30 мин при <15

    o

    C.Их нейтрализовали путем погружения в 0,4 М трис-HCl, рН 7,5, а затем окрашивали 5 мг/

    мл 4¢,6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI). Сто

    комет из каждого геля анализировали с помощью флуоресцентной

    микроскопии путем визуального осмотра, присваивая каждой комете

    значение 0±4 в соответствии со степенью повреждения. Таким образом, общий балл

    находился в диапазоне от 0 до 400 произвольных

    единиц. Показатель в произвольных единицах тесно коррелирует с

    % ДНК в хвосте, оцененным с помощью анализа компьютерного изображения

    , 300 единиц соответствует примерно 55%

    ДНК в хвосте [8].

    2.2.2 Щелочное раскручивание/нейтральное

    электрофорез (A/N)

    После инкубации с буфером/ферментом и обработки щелочью

    , как описано выше, предметные стекла нейтрализовали путем погружения

    в 0,4 MTris-HCl, рН 7,5, в течение 10 мин, а затем

    переносили в ТВЕ (45 мМтрис-борат, 1 мМЭДТА,

    рН 8,0). Их подвергали электрофорезу в течение 10 мин при 25 В,

    10 мА при <15

    или

    °С. Окрашивание и оценку проводили

    , как указано выше.

    2.3 Подготовка корней Vicia faba

    Семена Vicia faba замачивали на ночь в воде и проращивали при комнатной температуре на влажных гранулах перлита.

    Через 4±5 дней удаляли по 1 см каждого растущего кончика корня.

    . Для каждой экспериментальной точки пять кончиков корней

    объединяли и хранили в растворе Хоугланда (Sigma) на льду

    до использования. Их обрабатывали различными концентрациями MMS

    в растворе Хогланда, промывали PBS и мелко рубили лезвием бритвы в 0.8 мл PBS с 10 мМ

    ЭДТА. Эта обработка высвободила ядра, которые

    очистили от дебриса путем фильтрации через 20-мм нейлоновую ткань.

    Сорок мл ядерной суспензии смешивали с Основные методы клеточной и молекулярной биологии

    ДНК-гель-электрофорез — это метод, используемый для разделения и идентификации фрагментов ДНК по размеру.

    фрагмента ДНК разного размера загружаются в пористый гель, изготовленный из агарозы — углевода, содержащегося в красных водорослях.

    При приложении электрического поля фрагменты будут мигрировать через гель благодаря отрицательно заряженным фосфатным группам в нуклеотидах ДНК.

    Меньшие фрагменты ДНК легче мигрируют через гель, чем более крупные фрагменты, которым труднее перемещаться по гелевой матрице.

    Когда анализ геля завершен, расположение образцов ДНК можно сравнить с серией фрагментов или полос известного размера, называемой лестницей ДНК.

    Присутствие интересующего вас фрагмента может быть затем подтверждено на основе его размера, который определяется путем сравнения относительного положения вашего тестового образца с фрагментами лестницы.

    Агарозные гели готовят с использованием раствора в процентном соотношении по массе к объему. Таким образом, из 1 грамма агарозы в 100 мл буфера получится 1% гель. Гели с более низким процентным содержанием лучше разрешают более крупные фрагменты, а гели с более высоким процентным содержанием облегчают идентификацию более мелких фрагментов. Чтобы начать процедуру изготовления геля, отвесьте соответствующую массу агарозы в колбу Эрленмейера.

    Добавить рабочий буфер в колбу, чтобы объем буфера не превышал 1/3 объема колбы. Затем встряхните, чтобы перемешать.

    Растопите смесь агарозы/буфера, нагревая ее в микроволновой печи на максимальной мощности. Каждые тридцать секунд вынимайте колбу и взбалтывайте содержимое, чтобы хорошо перемешать. Повторяйте до тех пор, пока агароза полностью не растворится.

    Далее добавляют бромид этидия до концентрации 0,5 мг/мл. Бромид этидия представляет собой ароматическое соединение, которое помещается между отдельными парами оснований ДНК или интеркалирует и заставляет ДНК излучать интенсивную оранжевую флуоресценцию в ультрафиолетовом свете.Важно отметить, что бромистый этидий является канцерогеном, поэтому при работе с гелями, содержащими это соединение, всегда следует надевать перчатки.

    Чтобы предотвратить деформацию лотка для геля, дайте агарозе остыть, поместив ее на водяную баню при температуре 65ºC.

    Пока агароза охлаждается, подготовьте форму для геля, поместив лоток для геля в устройство для литья. В качестве альтернативы вы можете использовать ленту, чтобы запечатать открытые края лотка для геля, чтобы создать форму. Помещение гребенки в гель создает лунки, в которые загружается ДНК.Убедитесь, что гребенка создаст лунку соответствующего размера для вашего образца ДНК.

    Залейте расплавленную агарозу в гелевую форму и дайте ей затвердеть при комнатной температуре.

    После того, как агароза затвердеет, выньте расческу. Если гель не будет использоваться сразу, заверните его в пищевую пленку и храните при температуре 4ºC до использования.

    Если гель будет использоваться немедленно, поместите его в коробку с гелем.

    Чтобы начать эту процедуру, добавьте краситель, загружающий гель, в образцы ДНК, которые необходимо разделить.Загрузка красителя обычно производится в 6-кратной концентрации. Загрузка красителя помогает визуализировать и загружать образцы в лунки, а также помогает определить, насколько далеко образцы мигрировали во время анализа.

    Установите источник питания на желаемое напряжение.

    Теперь добавьте в коробку с гелем достаточное количество рабочего буфера, чтобы покрыть поверхность геля. Обязательно используйте тот же рабочий буфер, что и для приготовления геля.

    Подсоедините провода гелевой коробки к источнику питания и включите его.Помните, что ДНК заряжена отрицательно и будет двигаться к положительному аноду, обычно красного цвета. Убедитесь, что черный провод или катод не подсоединены к нижней части коробки с гелем. Так что вы не забывайте, имейте в виду, что черные кошки – это невезение, или негатив, и черный CAThode, следовательно, негативен. Доведите гель до красного цвета или до анода. Убедиться, что коробка с гелем и блок питания работают; появление пузырьков на электродах свидетельствует о протекании тока.

    Снимите крышку коробки с гелем. Медленно и осторожно загружайте образцы ДНК в гель. Опять же, загрузочный краситель в образце позволяет образцу погрузиться в гель и поможет отследить, как далеко прошел образец. Маркер размера ДНК или лестница всегда должны быть загружены вместе с экспериментальными образцами.

    Замените крышку. Дважды проверьте, что электроды вставлены в правильные разъемы на блоке питания.

    Включите питание. Запустите гель, пока краситель не переместится на соответствующее расстояние.

    По завершении электрофореза отключите питание и снимите крышку коробки с гелем.

    Извлеките гель из коробки и слейте лишний буфер с поверхности геля. Поместите лоток с гелем на бумажные полотенца, чтобы поглотить оставшийся рабочий буфер.

    Для визуализации фрагментов ДНК удалите гель из лотка для геля и подвергните гель воздействию ультрафиолетового света.

    Фрагмент ДНК

    должен проявляться в виде оранжевых флуоресцентных полос. Сфотографируйте гель.

    По окончании эксперимента утилизируйте гель и рабочий буфер надлежащим образом в соответствии с правилами учреждения. Опять же, не забывайте всегда обращаться с гелем и рабочими буферами в перчатках, чтобы избежать воздействия бромистого этидия.

    Теперь, когда вы узнали, как проводить гель-электрофорез ДНК. Давайте посмотрим на некоторые последующие приложения и варианты этого очень полезного метода.

    Здесь вы видите результат электрофореза в агарозном геле после разделения продуктов ПЦР. Фрагменты ДНК, загруженные в гель, видны в виде четко очерченных полос.Стандарт или лестница ДНК должны быть разделены до такой степени, чтобы можно было с пользой определить размеры полос образца. В этом примере фрагменты ДНК из 765 пар оснований, 880 пар оснований и 1022 пар оснований разделяют на 1,5% агарозном геле с помощью 2-логарифмической лестницы ДНК.

    Помимо подтверждения наличия интересующего фрагмента ДНК, электрофорез ДНК в геле можно сочетать с процедурами очистки геля. Обычно лезвие бритвы используется для вырезания интересующего фрагмента ДНК, чтобы его можно было собрать и восстановить образец ДНК внутри него.

    Электрофезия в агарозном геле также может быть объединена с переносом блоттинга, который включает перенос ДНК или РНК на целлюлозную мембрану, где можно использовать радиоактивные зонды для идентификации определенных последовательностей ДНК или РНК в образце, разделенном электрофоретически.

    Стандартный гель-электрофорез ДНК не идеален для разделения высокомолекулярных ДНК размером более 15–20 т.п.н., таких как геномная ДНК. Для разделения больших образцов ДНК используется гель-электрофорез в импульсном поле, который включает воздействие на гель изменяющегося или пульсирующего электрического поля в разных направлениях.Этот метод включает в себя специальный аппарат для подачи геля, который имеет пары электродов, расположенных в разных ориентациях вокруг геля. Это можно использовать для обнаружения различий в размерах геномов между популяциями организмов, например, объединенные образцы ДНК из разных микробных сообществ, взятые из разных озерных сред, которые вы видите здесь.