Коллагеновые препараты: Что такое коллаген и для чего он нужен?

Содержание

Могут ли таблетки с коллагеном разгладить морщины

Мода на биологически активные добавки и витаминные комплексы для красоты пришла к нам из Японии, где такие препараты принимают почти 90% населения. В Японии «таблетки красоты» назначает врач, в России же их можно купить без рецепта в аптеке или интернет-магазине.

Если забить в поисковике популярного интернет-магазина, продающего витаминные комплексы для здоровья, «витамины красоты», он предложит около двух тысяч разных вариантов. Среди самых популярных – препараты для красоты кожи, волос и ногтей, добавки с коллагеном и гиалуроновой кислотой.

Производители обещают, что эффект от приема превзойдет результат от использования наружных средств ухода, и объясняют, что, в отличие от кремов и сывороток, которые работают только снаружи, «волшебные» таблетки работают изнутри, восстанавливая и поддерживая клетки в более глубоких слоях кожи.

По мнению Екатерины Гуреевой, врача-эндокринолога сети клиник «Атлас», препараты, продающиеся без рецепта, как правило, имеют в своем составе очень маленькие дозировки действующих веществ, а потому ждать от них чуда точно не стоит.

«В медицине понятия «витамины красоты», конечно же, нет», — говорит она.

В понимании покупателей и маркетологов такие комплексы — это витамины и микроэлементы, которые могут влиять на качество кожи, волос и ногтей. Но медики относятся к этому термину с сомнением. «Строго говоря, это понятие едва ли можно назвать корректным, потому что на здоровье и внешность человека влияют не только вещества, но и образ жизни. Поэтому перекладывать всю ответственность за красоту на витамины не стоит», — уверена врач.

По словам Юлии Андреановой, врача-дерматовенеролога, клиники «РЖД-Медицина» в Твери, чаще всего в составе «таблеток красоты» — концентрированный витаминный комплекс. «Конечно, в случаях, когда кожа совсем обезвожена, а питание совершенно неправильное, улучшения от приема таких таблеток будут», — полагает она.

Но считать подобные препараты панацеей от всех бед, врач не советует. «Витамины и микроэлементы мы должны получать комплексно, с правильным питанием, а не одними таблетками. Если питание неполноценное, нерациональное и не сбалансированное, ни витамины, ни минералы с помощью таких препаратов мы не восстановим», — говорит Андреанова.

Многие задаются вопросом: есть ли разница между БАДами и витаминами красоты. Андреанова объясняет, что разница лишь в том, что витамины являются лекарственным средством и, в отличие от БАДов, проходят регистрацию. А эффективность и тех, и других зависит от дозировки конкретных витаминов и минералов в составе препарата. При этом эффекта от слишком маленьких доз не будет, а вот слишком высокие значения могут навредить и вызвать нежелательные реакции – от аллергического дерматита до расстройства ЖКТ.

«В составе этих так называемых «таблеток красоты» часто бывает слишком высокая концентрация аскорбиновой кислоты в сочетании с янтарной кислотой. А это может вызвать язвенную болезнь», — предупреждает врач.

Алекcандра Богадельникова, врач-дерматолог, к.м.н., эксперт лаборатории PHYTO уверена: положительный эффект от «таблеток красоты» будет только у здоровых людей. Она объясняет, что задача любых БАДов и витаминных комплексов – восполнить недостаток тех или иных микроэлементов в организме, но только в том случае, если этот недостаток действительно есть.

«В одной капсуле может содержаться слишком высокая доза витаминов, микроэлементов или выжимки из растений. Но не каждый организм способен успешно усвоить эти добавки. Такие препараты могут стать причиной накопления микролитов в почках и в желчном пузыре», — дополняет она.

Во избежание проблем со здоровьем она не рекомендует принимать «таблетки красоты» самостоятельно, без консультации со специалистом.

Несмотря на скептическое отношения врачей, с каждым годом на рынке появляется все больше разновидностей таблеток и витаминов красоты. Самые популярные на сегодняшний день – препараты с коллагеном и гиалуроновой кислотой. Александра Богадельникова объясняет это тем, что оба вещества легко усваиваются организмом, но, предупреждает, ждать от них «чудес» не стоит.

«Коллаген и гиалуроновая кислота в виде добавок не разгладят уже имеющиеся морщинки, но помогут вам предотвратить появление новых признаков старения и улучшат внешний вид», — говорит она.

Екатерина Гуреева не выступает против препаратов с коллагеном, но советует выбирать варианты с веществом морского происхождения, например, из медуз, осьминогов, трески или лосося. «Коллаген следует принимать натощак вместе с витамином С. Также будет полезно совмещать прием коллагена вместе с другими антиоксидантами – витаминами А, Е и цинком», — объясняет врач.

А вот прием гиалуроновой кислоты в виде биологически активных добавок эндокринолог считает нецелесообразным. «Оправдано лишь местное введение и применение гиалуроновой кислоты, и оно достаточно эффективно, когда проводится по показаниям», — считает Гуреева.

Однако коллаген, который вы приобретаете в таблетках, обязательно должен быть сертифицирован. «Нельзя без разбора заказывать все подряд в интернете. Очень часто коллаген в таблетках вызывает расстройства ЖКТ», — предупреждает Юлия Андреанова.

Врач советует все же прибегать к натуральным источникам коллагена — он содержится в костных бульонах, хрящах и холодце.

ПЕРВЫЙ ЖИВОЙ КОЛЛАГЕН. ПРОИЗВОДИТЕЛЬ.ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ

ЗУБНАЯ ПАСТА DR. FRIDMAN, ORIGINAL С КОЛЛАГЕНОМ

1400 р.

ОПИСАНИЕ:

Дентальная паста эффективно восстанавливает и надежно защищает органы и ткани полости рта, обеспечивая высочайший уровень здоровья.

Обеспечивает комплексный уход, устраняет симптомы, связанные с ксеростомией (сухостью в полости рта), укрепляет десны, обеспечивает свежее и свободное дыхание.

Клиническая эффективность: – очищение и дезодорирующее действие; – укрепление твердых тканей зубов, профилактика кариеса; – восстановление механических повреждений мягких тканей; – устранение кровоточивости десен; – нейтрализация запахов; – стимуляция обменных процессов в мягких тканях; – выраженный противовоспалительный эффект; – восстановление баланса иммунитета слизистой оболочки полости рта.

Дентальная паста на основе коллагена и цитрата цинка деликатно и эффективно очищает зубы и десны от различных видов налета, снижает темп образования зубных отложений, увлажняет слизистую оболочку, нейтрализует неприятный запах. Масло перечной мяты, ментол и экстракт цветков розы обеспечивают длительную свежесть дыхания, формируя дезодорирующий эффект.

Эффективное восстановление баланса МУКОЗАЛЬНОГО иммунитета в полости рта!

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ:

Произвольное количество пасты нанесите на зубную щетку, чистите зубы не менее 1,5 минут. Прополощите теплой водой. Через 1-2 минуты рекомендуется использовать ополаскиватель Dr. Fridman, original с коллагеном. Безопасно при случайном проглатывании.

СОСТАВ: Sorbitol, Aqua, Hydrated Silica, Hydrolyzed Collagen, Sodium Coco-Sulfate, Zinc Citrate, Glycerin, Xylitol, Aloe Barbadensis Leaf Juice, Camellia Sinensis Leaf Extract, Mica, Menthol, Rosa Canina Flower Extract, Aroma, Mentha Piperita Oil, Sucralose, Bisabolol, Charcoal Powder, Xanthan Gum, Silver, Hydroxyapatite, Sodium Citrate, Sodium Benzoate, Potassium Sorbate, Citric Acid, CI 77891.

ОБЪЕМ: 100мл.

СРОК ГОДНОСТИ: 24 месяца, с даты изготовления.

ДАТА ИЗГОТОВЛЕНИЯ (ДЕНЬ, МЕСЯЦ, ГОД) НОМЕР ПАРТИИ:

см. на шве тубы.

ХРАНИТЬ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ:

от 0 до +25 °С в защищённом от света месте.

ИЗГОТОВЛЕНО ПО ЗАКАЗУ: ООО «ПЕРСПЕКТИВНЫЕ МЕДИЦИНСКИЕ ТЕХНОЛОГИИ»

ПРОИЗВОДИТЕЛЬ: ООО «Дентал-Косметик-Рус», 141707, Россия, Московская область, г. Долгопрудный, Проспект Пацаева, д. 7, к. 6

ПРЕДСТАВИТЕЛЬ: ООО «Перспективные Медицинские Технологии» 123557, г. Москва, ул. Средняя Калитниковская, д. 27, стр. 1 Тел.: +7(968) 794 77 77 Сайт: collagen-pmt.ru Интернет-магазин: collagen-pmt.shop Отзывы о продукции принимаем по адресу: [email protected]

ГОСТ 7983-99

Коллаген: какие средства более эффективны и почему? Объясняет врач-дерматолог

Ирина Котова, врач дерматокосметолог, трихолог,

Коллаген: животный, морской и растительный. Что лучше?

Ближе всего по своему составу человеку коллаген животного происхождения. Его еще называют «бычий», так как это вещество получают из шкуры крупного рогатого скота.

Какие недостатки есть у животного коллагена?

У такого коллагена крупные молекулы, а значит косметические средства, содержащие животный коллаген, не влияют на содержание собственного коллагена в дерме, так как его молекулы просто не могут проникнуть сквозь защитный слой эпидермиса из-за своего размера.

То есть препараты с животным коллагеном неэффективны в борьбе с возрастными изменениями кожи. Но если крем содержит кроме коллагена витаминные комплексы и пептиды, то он все равно может оказать положительное влияние на кожу.

Проще всего нашему организму усвоить коллаген морского происхождения. Именно он обладает наибольшей биодоступностью, когда мы применяем его системно.

Морской коллаген — это также коллаген животного происхождения. Производится он из покрова и костного остова рыб. Морской коллаген наиболее близок по аминокислотному составу к человеческому и обладает более высокой проникающей способностью.

Основной недостаток косметических средств с морским коллагеном — вероятность возникновения аллергических реакций.

Также минус препаратов с морским коллагеном в том, что они стоят дороже. Так как морской коллаген чувствителен к перепаду температур, то при его производстве и хранении необходимо соблюдать определенные требования, что повышает стоимость такой продукции.

Растительный коллаген: что это такое?

В составе некоторых косметических средств можно увидеть термин «растительный коллаген». Это не совсем правильно. В любом случае коллаген — это белок животного происхождения. 

Растительным коллагеном принято называть гидролизированный белок пшеницы, который по своим свойствам похож на коллаген.

При этом растительный коллаген лучше проникает в кожу за счет своей низкой молекулярной массы.

Но производство пшеничных протеинов высокотехнологическое и дорогостоящее, поэтому главным недостатком средств с растительным коллагеном является их цена.


Кому можно использовать косметические средства с коллагеном?

Таблетки с коллагеном: это работает?

Независимо от того, какие цели мы преследуем, используя средства с коллагеном, принимать его лучше системно и употреблять внутрь.

На сегодняшний день существует большое количество биологических добавок с коллагеном. Наибольшей биодоступность при этом обладает коллаген в виде порошка или в форме раствора. Кроме того, коллаген может быть употреблен в виде капсул и таблеток, но их биодоступность несколько ниже.

Не стоит переоценивать крем с коллагеном

Гидролизированный коллаген или желатин обладает способностью удерживать влагу, образует защитную пленку на поверхности кожи.

Таким образом, крема и маски на основе коллагена обладают хорошим увлажняющим эффектом, что в свою очередь, создает временный эффект выравнивания поверхностных морщин и лифтинга.


Цена и качество препаратов с коллагеном: как сэкономить

А вы используете средства с коллагеном? Расскажите о своем опыте в комментариях!

21 октября 2016

Реклама

Комментарии

5 шагов для стимулирования производства коллагена и эластина

Молодость и здоровье кожи поддерживается двумя жизненно важными белками: эластином и коллагеном. С возрастом выработка этих белков понижается, кожа теряет эластичность и, как следствие, появляются первые морщинки. К счастью существуют безопасные и эффективные методы, которые помогают стимулировать синтез коллагена и эластина.

Шаг 1. Обновление

Используйте деликатный пиллинг для отшелушивания кожи. Устранение мёртвых клеток кожи c поверхностного слоя кожи подготавливает кожу для дальнейшего интенсивного ухода, а также стимулирует выработку нового коллагена и эластина и придает коже более молодой вид.

Шаг 2. Витаминизация

Жизненно важную роль в производстве эластина и коллагена играет витамин C. Не менее важны для молодости кожи витамины А, D и E.

Обратите внимание на продукты, богатые витамином C, такие как брокколи, киви, сладкий перец и цитрусовые. 

Насытить кожу помогут Ампулы с Витамином С DOCTOR BABOR. Они содержит 20% стабильного усиленного витамина C, 2 вида гиалуроновой кислоты и линолевую кислоту. Усилить действие ампул и продлить эффект поможет Крем Комплекс С, который содержит витамины красоты A, C и E.

Источником витамина A: зелёные и жёлтые овощи, печень, икра и молочные продукты.

Для интенсивного обновления кожи отлично подойдёт Концентрат A16, в состав которого входит Retinew A16 — гипоаллергенный и более эффективный аналог ретинола (витамина А).

Витамином D богаты морская рыба и яичный желток. Витамин E вы найдёте в растительных маслах, орехах, фасоли.

Витаминный заряд коже даст концентрат мгновенного действия — Ампулы Мультивитамины. Витамин А — стимулирует процессы клеточного обновления кожи; провитамин А + B5 — активизируют процессы регенерации и успокаивают; витамин Е в липосомах — защищает от свободных радикалов; биотин — поддерживает здоровье кожи.

Шаг 3. Белок

Добавьте одну или две порции здорового белка в ваш ежедневный рацион. Здоровые продукты, богатые белками, включают тофу, орехи, семена, молоко и творог.

Шаг 4. Дополнительный коллаген

Для интенсивной коллагеностимуляции, корректирующей первые возрастные изменения, коже необходима профессиональная помощь. Радикальным методом являются инъекции. Но если Вы не сторонник кардинальных вмешательств, то в качестве альтернативы стоит рассмотреть Комбинацию из двух продуктов LIFTING CELLULAR: концентрат Коллаген Буст Инфьюжн и крем Коллаген Бустер Крем.

Шаг 5. Защита от ультрафиолета и синего света

Кожу необходимо защищать от вредного воздействия UF и HEV-лучей, которые расщепляют коллаген и эластин. Предотвращают повреждение клеток солнцезащитные средства с фактором защиты от солнца (SPF) от 15 и выше. Применять их необходимо за 30 минут до выхода на улицу. 

Для защита от синего света применяются средства со мощными антиоксидантами, такие, как ампулы BABOR «Идеальное сияние» и линейка Skinovage VITALIZING с комплексом защиты от цифрового старения Blue Light Protect с пептидами какао, сахаридами и полифенолами.

Коллаген и соевые бобы (лицитин)- препарат для восстановление кожи, 60 шт

Коллаген и соевые бобы (лицитин)- препарат для восстановление кожи, 60 шт

Коллаген – фибриллярный белок, составляющий основу соединительной ткани организма (сухожилие, кость, хрящ, дерма и т. п.) и обеспечивающий ее прочность и эластичность.

Между волокнами находятся фибробласты — это клетки, которые синтезируют эластин и прочие компоненты внеклеточного матрикса.

Когда организм молод, в нем преобладает процесс синтеза коллагена над распадом этого вещества. Однако организм стареет, и с возрастом равновесие между разрушением коллагена и его синтезом постепенно нарушается.

Со временем обновление коллагеновых волокон начинает замедляться, а также снижается содержание в организме гиалуроновой кислоты, внутриклеточного матрикса.

Структура коллагеновых волокон несколько меняется: в ней возникают поперечные межмолекулярные и межфибриллярные связи, они являются весьма прочными и уплотняют дерму, повышая ее прочность. Однако одновременно при этом снижается упруго-эластические свойства дермы; одновременно происходит дегидратация коллагеновых структур – то есть, в них понижается влагосодержание. Результат этих процессов выглядит так: кожа становится сухой, дряблой, стареет, на ней появляются морщинки, складки. А морщины, как известно, являются первым признаком приближения старости. Именно от коллагена зависит, насколько быстро она наступит и именно он дает разгадку того, как с ней бороться.

Изофлавоны сои – это активные соединения, относящиеся к группе фитоэстрогенов. Фитоэстрогены-вещества растительной природы, химически сходные с человеческим гормоном эстрогеном, однако обладающие гораздо меньшей активностью.

Когда уровень эстрогенов в организме высок, фитоэстрогены могут блокировать более активные их формы и тем самым предупреждать развитие связанных с гормонами заболеваний, в том числе и рака молочной железы. Когда же уровень эстрогенов низок (как это бывает после менопаузы), фитоэстрогены могут заменить организму его собственные эстрогены, ослабляя приливы и сохраняя здоровы ми кости. Изофлавоны сои могут также обладать антиоксидантными свойствами и действовать как антикоагулянты.

Исследования показали, что продукты сои могут защищать от заболеваний сердца, снижая уровень липопротеидов низкой плотности (ЛПНП, “плохого” холестерина) и значительно повышая уровень липопротеидов высокой плотности (“хорошего” холестерина). Соя более эффективна у людей с высоким уровнем холестерина. Если уровень холестерина близок к нормальному, ее эффект выражен слабее и для получения одинакового результата требуется большее ее количество.

В азиатских странах, где соя является основой рациона, частота заболеваний некоторыми формами рака значительно ниже, чем в Европе и США. Исследования показали, что регулярное употребление содержащих сою продуктов может защитить от рака молочной железы, предстательной железы и эндометрия. В опытах на животных добавление сои к пище значительно снижает вероятность формирования раковых опухолей и, в случае наличия рака, образования метастазов.

Исследования показали, что приливы и другие симптомы менопаузы относительно редки в Азии, где женщины едят много продуктов сои. Кроме того, одно из наблюдений показало, что у европейских женщин, в суточный рацион которых входило по 45 г сои, частота приливов уменьшилась на 40%. Изофлавоны сои могут также способствовать сохранению плотности костей. В одной работе показано, что введение в рацион 40 г соевого белка в день значительно повышает плотность костей позвоночника-области, часто страдающей при остеопорозе.

Действие препарата:

  • улучшает способность кожи к поглощению и удержанию влаги, повышает упругость и эластичность кожи,
  • сокращает появление морщин,
  • стабилизирует жирность кожи, поддерживает баланс между количеством влаги и кожного сала,
  • выравнивает углубления и впадины на поверхности дряблой кожи,
  • помогает вернуть тонус и эластичность обвисшей груди,
  • выравнивает морщинки вокруг глаз,
  • убирает пигментные пятна, расширяет капилляры,
  • уменьшает вредное воздействие ультрафиолета, вызывающее преждевременное старение кожи,
  • улучшает состояние волос и ногтей,
  • ослабляет приливы во время менопаузы,
  • снижает уровень холестерина и риск сердечно-сосудистых заболеваний,
  • предупреждает остеопороз,
  • профилактика рака.

Показания к применению:

  • недостаточно увлажненная кожа, морщинистая кожа, пигментные пятна на коже;
  • грубая, увядающая, тусклая кожа;
  • восстановление кожи после повреждений, избавление от шрамов;
  • остеопороз.

Состав: порошок  рыбьего коллагена, экстракт соевых бобов, масло соевых бобов, пчелиный воск, желатин, глицерин, вода. Активные ингредиенты на 100 гр.: протеин – 27,82 гр., изофлавоны сои – 1,04 гр.

Способ применения: перорально, запивая водой, 2 раза в день по 2 капсулы после еды.

Хранение: хранить в плотно закрытой упаковке, в сухом темном прохладном месте.

Внимание: Избегайте одновременное применение других БАДов с изофлавонами сои.

Форма выпуска: 60 капсул по 500мг.

Срок годности: 24 месяца.

Производство: Китай.

YON-KA.RU » Что такое коллаген?


Кожа – самый большой орган в организме, и она в основном состоит из белка. Коллаген – это белок, который совместно с эластином (другим белком), придаёт вашей коже упругость и сияние.

Когда вы взрослеете, коллаген в коже разрушается быстрее, а организм вырабатывает его меньше. Это приводит к снижению упругости и образованию морщин – одним из первых физических признаков старения. Наличие большого количества коллагена позволяет нам не стареть.

В этой статье мы рассмотрим тему коллагена и его роль в старении. Мы поговорим о влиянии старения на выработку коллагена и о том, что вы можете сделать, чтобы сохранить молодость.

Что такое коллаген?

Коллаген является самым распространённым белком не только в коже, но и в организме. Он играет важную роль в улучшении структуры кожи и является одним из основных строительных блоков для костей, мышц, хрящей, связок и сухожилий. Он также содержится в глазах, зубах и кровеносных сосудах.

Коллаген подобен клею, который скрепляет различные части тела. Слово коллаген происходит от греческого «kólla» – клей. Представьте, что ваше тело дом, а коллаген – удерживает потолок и стены вместе.

Коллаген содержит 19 различных аминокислот. Организм самостоятельно производит коллаген, но это производство со временем замедляется, и коллаген в вашей коже начинает разрушаться быстрее.

Как старение влияет на коллаген?

Содержание коллагена в белке тела составляет около 30-40% и примерно 75-80% коллагена в белке вашей кожи. Это один из трех основных компонентов кожи, который совместно с эластином и гликозаминогликанами, обеспечивает текстуру, упругость и прочность кожи.

С возрастом, ваша кожа меняется во многих отношениях. Она становится тоньше, суше и более склонна к образованию морщин. Когда волокна коллагена разрушаются, ваша кожа теряет эластичность и, поскольку организм со временем производит меньше коллагена, кожа восстанавливается медленнее. В результате появляются морщины и дряблость кожи.

Старение – не единственное, что влияет на расщепление коллагена. Воздействие ультрафиолетового излучения ухудшает качество коллагена и эластина, а курение ускоряет процесс старения кожи. Чрезмерное потребление сахара и дефицит в рационе витамина А, витамина С, железа и пролина также являются причинами увеличения распада коллагена.

Советы для уменьшения расщепления коллагена

Вы не можете остановить старение, но можете уменьшить его влияние на вашу кожу. Что вы можете сделать, для увеличения производства коллагена организмом, замедлить его расщепление и увеличить выработку коллагена в коже:

  • Массаж лица улучшает циркуляцию крови и выработку коллагена.
  • Бросьте курить и употреблять табачные изделия.
  • Сократите потребление сахара.
  • Пейте много воды, чтобы сохранить увлажнение кожи.
  • Принимайте коллагеновый протеин.
  • Регулярно используйте кремы в ежедневном уходе.

Некоторые препараты, содержащие коллаген, утолщают верхний слой кожи для улучшения гидратации, но не помогают коже вырабатывать коллаген. Существуют средства для ухода за кожей, которые стимулируют выработку коллагена. Одним из ключевых ингредиентов, для стимуляции выработки коллагена, являются пептиды. Некоторые антивозрастные препараты Yon-Ka Paris содержат пептиды для создания и сохранения коллагена.

Препараты для ухода за кожей увеличивающие выработку коллагена

В организме более 28 видов коллагена. Большинство из них – четырех основных типов. Первый тип составляет 90% коллагена в организме, 2, 3 и 4 находятся в хряще, мышцах, органах и суставах. Коллаген 1 и 3 наиболее распространены в коже.

Как говорилось выше, по мере старения организм вырабатывает меньше коллагена, а вырабатываемый им коллаген более низкого качества.

Ингредиенты, для поддержания количества коллагена в организме, содержащиеся в препаратах

Yon-Ka:

Пептиды – представляют собой короткие цепочки аминокислот и являются строительными блоками белков, таких как коллаген. В средствах для ухода за кожей пептиды выполняют аналогичную роль, стимулируя кожу вырабатывать больше коллагена и сохраняя его.

  • Витамин С – антиоксидант, необходимый для естественного производства коллагена, поэтому его содержание в препаратах для ухода за кожей помогает коже вырабатывать коллаген.
  • Витамин B – известный как ниацинамид, витамин B3 улучшает вид кожи, а также увеличивает выработку коллагена.
  • Гиалуроновая кислота – помогает увлажнить кожу, делая ее более упругой и молодой.
  • Гликолевая кислота – отшелушивает и увлажняет кожу, стимулируя выработку коллагена.

Антивозрастные средства

Yon-Ka Paris производятся с использованием этих компонентов, усиливающих выработку коллагена, а также других растительных компонентов, которые укрепляют, подтягивают и разглаживают кожу:
  • Крем Advanced Optimizer Creme – заметно укрепляет и разглаживает кожу. Содержит белые пептиды люпина для сохранения коллагена, шиповника и морского коллагена, а также увлажняющие компоненты, такие как масло ши и гиалуроновая кислота.
  • Гель Advanced Optimizer Gel Lift – разглаживает и восстанавливает упругость кожи. Ключевые ингредиенты включают пептиды гибискуса, стимулирующие выработку коллагена, и хвощ, повышающий упругость.
  • Сыворотка Advanced Optimizer Serum – быстро впитывается и восстанавливает кожу, делая ее более упругой и гладкой. Содержит пептиды гибискуса, стимулирующие выработку коллагена, морской коллаген, хвощ и шиповник.

Заботясь о своей коже с помощью здорового питания и используя препараты Yon-Ka Paris в ежедневном уходе за кожей, вы сможете сохранить молодость на долгие годы.

Доппельгерц Бьюти Коллаген

Пептиды коллагена для более упругой и гладкой кожи

Доппельгерц Бьюти Коллаген со вкусом дыни и личи в питьевых флаконах содержит пептиды коллагена для Вашей красоты, специально подобранный комплекс витаминов и микроэлементов и экстракт ягод асаи.
 

  • Пептиды коллагена способствуют выравниванию поверхности кожи и повышению ее эластичности
  • Витамин А, цинк и биотин необходимы для поддержания кожи в хорошем состоянии
  • Медь – один из главных компонентов красоты, поскольку без нее становится невозможной выработка коллагена и эластина, отвечающих за молодость и подтянутость кожи. От данного минерала во многом зависит состояние сосудов и костей, цвет и блеск волос.
  • Экстракт асаи способствуют замедлению возрастных изменений кожи

Высококачественная биологически активная добавка Доппельгерц Бьюти Коллаген предназначена для длительного использования. Возможный эффект наступает через 4-8 недель.  

Кожа – зеркало нашей жизни

Свежая, жизненная кожа ассоциируется с молодостью, красотой и радостью жизни. Однако ввиду естественных процессов старения, а также из-за влияния окружающей среды кожа меняется –  теряет упругость и эластичность.
Ежедневный уход, хорошее питание и физические упражнения на свежем воздухе помогут вам дольше выглядеть моложе. Но есть также вещества, которые могут способствовать поддержанию состояния кожи изнутри: коллагеновые пептиды.
 
Когда мы молоды, наша кожа упругая, эластичная, гладкая и красивая. Она удерживает влагу и на ней нет морщин. Однако с годами образование коллагена уменьшается. 
 
С годами кожа:

  • Теряет влагу и становится более сухой
  • Становится менее эластичной
  • Становится тоньше и имеет тенденцию к образованию морщин

Коллаген как важный структурный компонент кожи

Коллаген является основным структурным компонентом кожи, составляющим около 80% ее соединительной ткани. Известно, что на свойства кожи влияют эндогенные факторы и факторы окружающей среды, включая старение, ультрафиолетовое излучение, гормоны и питание. 

С возрастом наша кожа становится тоньше: чем меньше коллагена, тем меньше эластичность кожи. Уже с 25 лет организм самостоятельно снижает выработку коллагена. Кроме того, внешние факторы, такие как ультрафиолетовое излучение солнца и вредные привычки, например, курение, могут ускорить потерю коллагена.

Активные компоненты пептиды коллагена VERISOL® в составе Доппельгерц Бьюти Коллаген могут стимулировать метаболизм кожи и противодействовать потере коллагенового внеклеточного матрикса изнутри. 
Положительный эффект пептидов VERISOL®  проявляется в улучшенной структуре поверхности кожи, более быстром росте ногтей с меньшим количеством сколов на ногтях. 

Какой эффект оказывают пептиды коллагена?

В дополнение к здоровому образу жизни пероральный прием коллагеновых пептидов также может оказывать положительное влияние на внешний вид кожи. Пептиды коллагена могут поддерживать красоту изнутри. Глубина морщин и тонких лицевых линий уменьшаются. Эластичность кожи также улучшается. Таким образом, пептиды коллагена способствуют поддержанию красивого и молодого внешнего вида кожи.

Эффективность пептидов коллагена в коже научно подтверждена. В 2 плацебо-контролируемых исследованиях с коллагеновыми пептидами на женщинах было проверено, как потребление коллагеновых пептидов изменяет внешний вид кожи. Кожа становится более упругой, а глубина морщин уменьшается:

  • Улучшение эластичности кожи: + 7% [2]
  • Увеличение концентрации эластина: + 18% [1]

Глубина морщин уменьшается на 7 процентов через 4 недели и на 20 процентов через 8 недель. [1] 

Каждый флакон Доппельгерц Коллаген Бьюти содержит 2,5 г коллагеновых пептидов, витаминов и микроэлементов, а также экстракт ягод асаи.


[1] Исследование с пептидами коллагена: Минимальный срок приема 8 недель; Proksch E et al.: Oral Intake of Specific Bioactive Collagen Peptides Reduces Skin Wrinkles and Increases Dermal Matrix Synthesis. Skin Pharmacol Physiol 2014; 27:113-119.

[2] Исследование с пептидами коллагена: Минимальный срок приема 4 недели: Proksch E et al.: Oral supplementation of Specific Collagen Peptides Has Beneficial Effects on Human Skin Physiology: A Double-Blind, Placebo-Controlled Study. Skin Pharmacol Physiol 2014; 27:47-55..

Улучшенный метод получения коллагена типа I из кожи

J Vis Exp. 2014; (83): 51011.

Кристина А. PACAK

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и боли медицина, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

Allison A. Mackay

1 Отделение анестезиологии, периоперационной и обезболивающей медицины, Бостонская детская больница

Дуглас Б.Cowan

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и болитной медицины, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

1 Департамент анестезиологии, Периоперативная и болевая медицина, Бостон Детская больница

2 Кафедра анестезии Гарвардской медицинской школы

Copyright © 2014, Journal of Visualized ExperimentsЭта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Растворимый коллаген 1 типа (COL1) широко используется в качестве адгезивного субстрата для клеточных культур и в качестве клеточного каркаса для регенеративных применений. Клинически этот белок широко используется в косметической хирургии, кожных инъекциях, костной пластике и реконструктивной хирургии. Источниками COL1 для этих процедур обычно являются не люди, что увеличивает вероятность воспаления и отторжения, а также передачи ксенобиотических заболеваний. Ввиду этого метод эффективной и быстрой очистки COL1 из ограниченного количества аутологичных тканей позволил бы обойти многие из этих проблем; однако стандартные протоколы изоляции длительны и часто требуют большого количества коллагеновых тканей.Здесь мы демонстрируем эффективный метод экстракции COL1, который сокращает время, необходимое для выделения и очистки этого белка, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов. Мы выбрали дерму в качестве источника ткани из-за ее доступности во время многих хирургических процедур. В этом методе используются традиционные экстракционные буферы в сочетании с принудительным перемешиванием и центрифужной фильтрацией для получения высокочистого растворимого COL1 из небольшого количества кориума. Вкратце, кожные биоптаты тщательно промывают в ледяной воде dH 2 O после удаления жира, соединительной ткани и волос.Образцы кожи очищают от неколлагеновых белков и полисахаридов с использованием 0,5 М ацетата натрия и высокоскоростного настольного гомогенизатора. Коллаген из остаточных твердых веществ затем экстрагируют 0,075 М буфером цитрата натрия с использованием гомогенизатора. Эти экстракты очищают с использованием центробежных фильтров с отсечкой 100 000 МВт, что дает препараты COL1 сравнимого или превосходящего качества по сравнению с коммерческими продуктами или препаратами, полученными с использованием традиционных процедур. Мы ожидаем, что этот метод облегчит использование аутологично полученного COL1 для множества исследовательских и клинических приложений.

Ключевые слова: Биоинженерия, выпуск 83, коллаген 1 типа, внеклеточный матрикс, тканевая инженерия, каркасный белок, дерма, кориум кожи и сухожилий с использованием некоторого варианта простого протокола кислотной экстракции с последующей нейтрализацией, что приводит к ресуспендированию матрицы организованных фибрилл COL1, которые можно использовать для множества биомедицинских приложений 1-4 .Хотя существует много примеров клинического применения COL1, немногие из них используют аутологичный COL1, потому что подготовка этого белка требует длительных экстракций, занимающих дни или недели для выполнения 5-7 . В результате исследователи и врачи обычно используют дорогие коммерческие препараты COL1, которые готовят с использованием нечеловеческих тканей, таких как кориум крысы, крупного рогатого скота или свиньи, или с использованием кожи, снятой с трупов или после мужского обрезания. Для регенеративных применений многие из этих продуктов проявляют изменчивость в отношении их способности образовывать твердые матрицы или тканевые конструкции, способные поддерживать прикрепление и рост клеток.Следовательно, существует явная потребность в новом стандартизированном методе, предназначенном для быстрого извлечения COL1 из доступных и многочисленных источников аутологичных тканей.

Такой метод сэкономит время и деньги в исследовательских условиях, где COL1 можно будет извлечь из интересующей животной модели и использовать для доклинических испытаний искусственных тканей, собранных на каркасах на основе коллагена. В то же время возможность использования в клинике быстро выделенного аутологичного COL1 повысит общую безопасность для пациентов, которые в противном случае получали бы аллогенные или ксеногенные препараты.Для пациентов, получающих аутогенный препарат, этот упрощенный метод значительно сократит интервал между забором биопсии и нанесением коллагена. По этим причинам мы стремились улучшить давно зарекомендовавший себя метод выделения и очистки COL1, используя высокоскоростное перемешивание и центрифугирование с эксклюзией по размеру. Этот метод прост в исполнении с использованием стандартных буферов и оборудования, которые можно найти во многих лабораториях. Используя высокоскоростное перемешивание, наш протокол сокращает время, необходимое для выделения растворимого кожного COL1, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов 8 .Важно отметить, что этот метод может быть легко реализован в клинических условиях для подготовки аутологически полученного COL1 для использования у пациентов во время одного набора процедур.

Протокол

Здесь мы продемонстрируем выделение COL1 из кожи ягненка. Как написано, этот протокол также может быть использован для успешного выделения COL1 из кожи кролика и человека.

1. Подготовьте образец кожи

  1. Перед использованием уравновесьте все реагенты до 4 °C.

  2. Промойте образец кожи (25–50 г) в ледяной воде dH 2 O и удалите шерсть, мех или волосы с помощью крема для депиляции.

  3. Используйте однолезвийное лезвие, чтобы очистить образец от соединительной ткани и жира.

  4. Промойте образец в ледяной воде dH 2 O.

  5. Нарежьте образец кожи на кусочки размером 1 см x 1 см однолезвийным лезвием.

2. Удаление неколлагенового солюбилизированного материала

  1. Взвесьте 5 г образца на 50 мл коническую пробирку и добавьте 30 мл охлажденного льдом 0,5 М ацетата натрия.

  2. Смешивайте пробирки в течение 1 мин при скорости 6 м/с с помощью адаптера для пробирок на 50 мл в настольном гомогенизаторе.

  3. Удалите надосадочную жидкость и повторите в общей сложности 7 циклов промывки ацетатом натрия.

  4. Промойте образец ледяной водой dH 2 O и перемешайте один раз, чтобы удалить остатки ацетата натрия.

  5. С помощью шпателя прижмите образец к стенке пробирки, чтобы удалить лишнюю жидкость, а затем перенесите его в свежую коническую пробирку объемом 50 мл.

3. Экстракция коллагена типа I

  1. Промойте образец дважды в 2 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия в течение 1 мин при скорости 6 м/с в настольном гомогенизаторе, сжимая образец и удаляя надосадочную жидкость после каждой промывки.

  2. Добавьте к образцу свежую аликвоту 2 мл/г 0,075 М буфера цитрата натрия.

  3. Выполните 6 последовательных циклов перемешивания в настольном гомогенизаторе со скоростью 1 мин и 6 м/с без удаления буфера между каждым циклом.

  4. Перенесите густой прозрачный супернатант в пробирку для сбора.

  5. Добавить дополнительно 1 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия к образцу и выполнить последний цикл перемешивания настольного гомогенизатора.

  6. Добавьте этот последний супернатант в пробирку для сбора.

  7. Пробирку для сбора отцентрифугировать при 3200 g в течение 10 мин при 4 °C.

  8. Перенесите супернатант в верхний отсек центробежного фильтрующего устройства с отсечкой по молекулярной массе 100 000.

  9. Центрифуга при 3200 g в течение 30 мин при 4 °C.

  10. Перенесите очищенный COL1 из верхнего отсека в чистую коническую пробирку и храните при 4 °C.

Репрезентативные результаты

Этот протокол изоляции COL1 требует около 2 часов 15 минут для завершения. На рис. 1 показана схема, на которой показаны основные этапы этой процедуры. Подготовка образца и выполнение 7 циклов высокоскоростного перемешивания и промывания ацетатом натрия занимает приблизительно 35 минут 90 045 (Рисунки 1A-C) . Выполнение одного цикла перемешивания и промывки с dH 2 O занимает приблизительно 5 минут (рисунки 1D и 1E) .Добавление цитрата натрия и выполнение одного цикла взбалтывания и ополаскивания образца с последующими 6 циклами перемешивания занимает приблизительно 45 минут (рисунки 1F и 1G) . Центрифугирование оставшихся твердых веществ из жидкого экстракта занимает 15 мин 90 045 (рис. 1H) . Наконец, перенос образца в фильтрующее устройство и выполнение еще одного этапа центрифугирования для концентрирования очищенного, солюбилизированного COL1 и удаления мелких белков занимает 30 минут (рисунки 1I и 1J) .Конечный продукт представляет собой концентрированный высокочистый препарат растворимого COL1, который может быть подвергнут дальнейшей полимеризации путем добавления Na 2 HCO 3 и инкубации при 37°C. Изображения фазово-контрастной микроскопии этого отвержденного продукта показывают фибриллы COL1, которые могут служить субстратом для прикрепления клеток к планшетам для тканевых культур или использоваться в качестве каркаса для трехмерных приложений тканевой инженерии (рисунки 2A и 2B) .

Рис. 1. Схематический обзор улучшенного метода выделения COL1.A ) Срезы дермы добавляют в коническую пробирку на 50 мл. B ) К образцу добавляют 0,5 М ацетата натрия. C ) Образец подвергают 7 циклам взбалтывания с заменой ацетатно-натриевого буфера после каждого цикла. D ) dH 2 О добавляют к образцу кожи. E ) Препарат подвергают 1 циклу встряхивания и сливают dH 2 O. F ) К пробе добавляют 0,075 М цитрата натрия. G ) Образец подвергают 6 циклам встряхивания. H ) Образец центрифугируют для удаления крупных твердых частиц. I ) Супернатант переносят в центробежный фильтр с отсечением по молекулярной массе 100000 в конической пробирке. J ) Это устройство центрифугируют и собирают вязкую жидкость, оставшуюся в верхнем отсеке.

Рис. 2. Быстрое выделение из дермы для получения COL1, полимеризованного в фибриллы. Растворимый COL1 нейтрализовали добавлением Na 2 HCO 3 и затем инкубировали при 37 °C.Фазово-контрастное изображение ( A ) и просвечивающая электронная микрофотография (показывающая сохранившуюся d-полосу) ( B ) фибрилл COL1, полученных с использованием нашего метода быстрой изоляции. Шкала баров = 10 мкм и 500 нм (соответственно). Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенное изображение.

Обсуждение

Важнейшим компонентом этого метода является повторное эффективное сжатие образца кожи для удаления избыточной жидкости. Крайне важно удалить как можно больше ацетата натрия на этапе 2.5, сжимая образец.Мы используем шпатель, чтобы прижать кожу к стенке тюбика; однако можно также использовать марлю, хотя это потребует удаления образца из пробирки и увеличит время, необходимое для выполнения этих шагов. Точно так же важно сжать образец на шаге 3.1, чтобы объем цитрата натрия был точным на последующих этапах экстракции. Отсутствие надлежащего удаления жидкости из образца на любом из этих этапов отрицательно скажется на конечном выходе COL1.Еще одним ключевым компонентом этого протокола является поддержание всех реагентов при 4 градусах Цельсия. Это обеспечивает эффективную экстракцию растворимого в кислоте COL1 и предотвращает затвердевание коллагена. Кроме того, процедуру можно проводить с использованием всех стерильных реагентов в стерильной среде. Это будет иметь особое значение для тех, кто хочет использовать этот метод для выделения COL1 для использования у людей. Многие коммерческие источники COL1 были эффективно стерилизованы гамма-облучением. К сожалению, эта практика значительно снижает его способность образовывать гели из-за фрагментации и денатурации белка 9,10 .

Эта процедура представляет собой оптимальные условия для экстракции COL1, что было определено в ходе многих экспериментов, проведенных для установления идеального соотношения образца кожи к объему буфера. Добавление большего количества пробирок предлагается, когда исследователь хочет использовать эту процедуру для больших образцов кожи. Исходя из нашего опыта, не рекомендуется добавлять больше образца или буфера, чем указано для каждой пробирки. Также стоит отметить, что шарики, состоящие из кремнезема, керамики, граната, оксида алюминия, карбида кремния или оксида циркония, которые обычно используются в сочетании с настольными гомогенизаторами, исключены из нашей процедуры.6 последовательных 1-минутных циклов перемешивания, описанных в шаге 3.3, необходимы из-за ограничения, накладываемого нашим оборудованием для перемешивания. Мы можем перемешивать образец только в течение 60 секунд за один раз, после чего машина требует остановки. Если у вас есть оборудование, которое можно настроить на 6 минут подряд, было бы неплохо переключиться на один шестиминутный цикл. Тем не менее, мы предлагаем строго соблюдать указанный вес образца и объемы буфера.

Мы обнаружили, что этот метод подготовки эффективно выделяет растворимый COL1 из образцов кожи ягненка, кролика и человека 8 .С другой стороны, этот протокол не был успешным при очистке COL1 из образцов кожи свиньи. Даже после обширных модификаций метода дерма свиньи производила чрезмерное количество пены из-за остаточных липидов и жира, что приводило к неэффективной экстракции COL1. И наоборот, COL1 можно выделить из цельных крысиных хвостов или изолированных сухожилий крысиных хвостов с использованием слегка модифицированного препарата, включающего гранулы лизирующего матрикса. Это было подробно описано ранее 8 .

Для ученых-исследователей потенциальное использование конечного солюбилизированного в кислоте продукта COL1, полученного с помощью этого метода, включает: 3-мерная (2- или 3-D) клеточная культура и c) создание 3-D каркасов для приложений тканевой инженерии.Хотя от любого метода очистки следует ожидать некоторой небольшой изменчивости от партии к партии, мы обнаружили, что эти жидкие препараты COL1 неизменно можно комбинировать с различными клеточными популяциями и отливать в формы. После нейтрализации рН и нагревания в результате получается затвердевшая искусственная ткань с пространственно ориентированными клетками, равномерно распределенными по всей матрице. В зависимости от формы формы эти конструкции могут быть изготовлены практически любой формы и размера 3,4,11-14 .

Таким образом, мы считаем, что наиболее убедительная причина для использования этого метода заключается в том, что он значительно сокращает время и усилия, необходимые для выделения высокочистого растворимого COL1 из источника аутологичной ткани, такого как небольшие биопсии кожи. Метод основан на давно зарекомендовавших себя процедурах и дает продукт, который соответствует или превосходит качество дорогих коммерческих препаратов в отношении чистоты COL1 и способности формировать стабильные трехмерные ткани. В то же время этот упрощенный метод позволяет эффективно и быстро выделять COL1 аутологичного происхождения, который можно безопасно использовать для множества клинических применений.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конкурирующих финансовых интересов для раскрытия.

Благодарности

Эта работа была поддержана исследовательским грантом от Национальных институтов здравоохранения (HL068915 для DBC), премией нового исследователя от исследовательского фонда Thrasher (для CAP), грантом в помощь от Американской кардиологической ассоциации (12GRNT11

8 для DBC), исследовательский грант от Фонда детского сердца (для DBC) и пожертвования в Фонд сердечной проводимости Бостонской детской больницы, Фонд семьи Райан и Дэвид Пуллман.

Ссылки

  • Nageotte J. Фибриллярная коагуляция in vitro дю коллаген dissous dans un acide dilué CR hebd. сеансы акад. Сей. 1927;184 [Google Scholar]
  • Schmitt FO, Hall CE, Jakus MA. Электронно-микроскопическое исследование структуры коллагена. J. Cell Comp. Физиол. 1942; 20:11–33. [Google Scholar]
  • Choi YH, et al. Сердечная проводимость через инженерную ткань. Являюсь. Дж. Патол. 2006; 169:72–85. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Pacak CA, Cowan DB.Изготовление миогенно-инженерных тканевых конструкций. Дж. Вис. Эксп. 2009. [Статья бесплатно PMC] [PubMed]
  • Cliche S, Amiot J, Avezard C, Gariepy C. Извлечение и характеристика коллагена с телопептидами или без них из куриной кожи. наук о птицеводстве. 2003; 82: 503–509. [PubMed] [Google Scholar]
  • Rajan N, Habermehl J, Cote MF, Doillon CJ, Mantovani D. Подготовка готового к использованию, хранения и восстановления коллагена типа I из сухожилия хвоста крысы для применения в тканевой инженерии.Нац. протокол 2006; 1: 2753–2758. [PubMed] [Google Scholar]
  • Seifter S, Gallop P. Получение и свойства растворимых коллагенов. В: Коловик С., Каплан Н., редакторы. Методы в энзимологии. Нью-Йорк: Академическая пресса; 1963. [Google Scholar]
  • Pacak CA, Powers JM, Cowan DB. Сверхбыстрая очистка коллагена I типа для применения в тканевой инженерии. Ткань англ. Методы части С. 2011; 17: 879–885. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Ohan MP, Dunn MG. Глюкоза стабилизирует коллаген, стерилизованный гамма-облучением.Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1188–1195. [PubMed] [Google Scholar]
  • Tyan YC, Liao JD, Lin SP, Chen CC. Изучение стерилизующего действия гамма-облучения поверхностей иммобилизованного коллагенового полипропиленового нетканого материала. Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1033–1043. [PubMed] [Google Scholar]
  • Ber S, Torun Kose G, Hasirci V. Инженерия костной ткани на узорчатых коллагеновых пленках: исследование in vitro. Биоматериалы. 2005; 26:1977–1986. [PubMed] [Google Scholar]
  • Liu Y, Sun S, Singha S, Cho MR, Gordon RJ.Трехмерное фемтосекундное лазерное моделирование коллагена для направленного прикрепления клеток. Биоматериалы. 2005; 26:4597–4605. [PubMed] [Google Scholar]
  • Thakar RG, Ho F, Huang NF, Liepmann D, Li S. Регуляция гладкомышечных клеток сосудов с помощью микроструктурирования. Биохим. Биофиз. Рез. Комм. 2003; 307: 883–890. [PubMed] [Google Scholar]
  • Лейтон Дж., Джаст Г., Эспер М., Кроненталь Р.Л. Губка из целлюлозы с коллагеновым покрытием: трехмерная матрица для культуры ткани опухоли Уокера 256. Наука. 1967; 155: 1259–1261.[PubMed] [Google Scholar]

Улучшенный метод получения коллагена типа I из кожи

J Vis Exp. 2014; (83): 51011.

Кристина А. PACAK

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и боли медицина, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

Allison A. Mackay

1 Отделение анестезиологии, периоперационной и обезболивающей медицины, Бостонская детская больница

Дуглас Б.Cowan

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и болитной медицины, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

1 Департамент анестезиологии, Периоперативная и болевая медицина, Бостон Детская больница

2 Кафедра анестезии Гарвардской медицинской школы

Copyright © 2014, Journal of Visualized ExperimentsЭта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Растворимый коллаген 1 типа (COL1) широко используется в качестве адгезивного субстрата для клеточных культур и в качестве клеточного каркаса для регенеративных применений. Клинически этот белок широко используется в косметической хирургии, кожных инъекциях, костной пластике и реконструктивной хирургии. Источниками COL1 для этих процедур обычно являются не люди, что увеличивает вероятность воспаления и отторжения, а также передачи ксенобиотических заболеваний. Ввиду этого метод эффективной и быстрой очистки COL1 из ограниченного количества аутологичных тканей позволил бы обойти многие из этих проблем; однако стандартные протоколы изоляции длительны и часто требуют большого количества коллагеновых тканей.Здесь мы демонстрируем эффективный метод экстракции COL1, который сокращает время, необходимое для выделения и очистки этого белка, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов. Мы выбрали дерму в качестве источника ткани из-за ее доступности во время многих хирургических процедур. В этом методе используются традиционные экстракционные буферы в сочетании с принудительным перемешиванием и центрифужной фильтрацией для получения высокочистого растворимого COL1 из небольшого количества кориума. Вкратце, кожные биоптаты тщательно промывают в ледяной воде dH 2 O после удаления жира, соединительной ткани и волос.Образцы кожи очищают от неколлагеновых белков и полисахаридов с использованием 0,5 М ацетата натрия и высокоскоростного настольного гомогенизатора. Коллаген из остаточных твердых веществ затем экстрагируют 0,075 М буфером цитрата натрия с использованием гомогенизатора. Эти экстракты очищают с использованием центробежных фильтров с отсечкой 100 000 МВт, что дает препараты COL1 сравнимого или превосходящего качества по сравнению с коммерческими продуктами или препаратами, полученными с использованием традиционных процедур. Мы ожидаем, что этот метод облегчит использование аутологично полученного COL1 для множества исследовательских и клинических приложений.

Ключевые слова: Биоинженерия, выпуск 83, коллаген 1 типа, внеклеточный матрикс, тканевая инженерия, каркасный белок, дерма, кориум кожи и сухожилий с использованием некоторого варианта простого протокола кислотной экстракции с последующей нейтрализацией, что приводит к ресуспендированию матрицы организованных фибрилл COL1, которые можно использовать для множества биомедицинских приложений 1-4 .Хотя существует много примеров клинического применения COL1, немногие из них используют аутологичный COL1, потому что подготовка этого белка требует длительных экстракций, занимающих дни или недели для выполнения 5-7 . В результате исследователи и врачи обычно используют дорогие коммерческие препараты COL1, которые готовят с использованием нечеловеческих тканей, таких как кориум крысы, крупного рогатого скота или свиньи, или с использованием кожи, снятой с трупов или после мужского обрезания. Для регенеративных применений многие из этих продуктов проявляют изменчивость в отношении их способности образовывать твердые матрицы или тканевые конструкции, способные поддерживать прикрепление и рост клеток.Следовательно, существует явная потребность в новом стандартизированном методе, предназначенном для быстрого извлечения COL1 из доступных и многочисленных источников аутологичных тканей.

Такой метод сэкономит время и деньги в исследовательских условиях, где COL1 можно будет извлечь из интересующей животной модели и использовать для доклинических испытаний искусственных тканей, собранных на каркасах на основе коллагена. В то же время возможность использования в клинике быстро выделенного аутологичного COL1 повысит общую безопасность для пациентов, которые в противном случае получали бы аллогенные или ксеногенные препараты.Для пациентов, получающих аутогенный препарат, этот упрощенный метод значительно сократит интервал между забором биопсии и нанесением коллагена. По этим причинам мы стремились улучшить давно зарекомендовавший себя метод выделения и очистки COL1, используя высокоскоростное перемешивание и центрифугирование с эксклюзией по размеру. Этот метод прост в исполнении с использованием стандартных буферов и оборудования, которые можно найти во многих лабораториях. Используя высокоскоростное перемешивание, наш протокол сокращает время, необходимое для выделения растворимого кожного COL1, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов 8 .Важно отметить, что этот метод может быть легко реализован в клинических условиях для подготовки аутологически полученного COL1 для использования у пациентов во время одного набора процедур.

Протокол

Здесь мы продемонстрируем выделение COL1 из кожи ягненка. Как написано, этот протокол также может быть использован для успешного выделения COL1 из кожи кролика и человека.

1. Подготовьте образец кожи

  1. Перед использованием уравновесьте все реагенты до 4 °C.

  2. Промойте образец кожи (25–50 г) в ледяной воде dH 2 O и удалите шерсть, мех или волосы с помощью крема для депиляции.

  3. Используйте однолезвийное лезвие, чтобы очистить образец от соединительной ткани и жира.

  4. Промойте образец в ледяной воде dH 2 O.

  5. Нарежьте образец кожи на кусочки размером 1 см x 1 см однолезвийным лезвием.

2. Удаление неколлагенового солюбилизированного материала

  1. Взвесьте 5 г образца на 50 мл коническую пробирку и добавьте 30 мл охлажденного льдом 0,5 М ацетата натрия.

  2. Смешивайте пробирки в течение 1 мин при скорости 6 м/с с помощью адаптера для пробирок на 50 мл в настольном гомогенизаторе.

  3. Удалите надосадочную жидкость и повторите в общей сложности 7 циклов промывки ацетатом натрия.

  4. Промойте образец ледяной водой dH 2 O и перемешайте один раз, чтобы удалить остатки ацетата натрия.

  5. С помощью шпателя прижмите образец к стенке пробирки, чтобы удалить лишнюю жидкость, а затем перенесите его в свежую коническую пробирку объемом 50 мл.

3. Экстракция коллагена типа I

  1. Промойте образец дважды в 2 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия в течение 1 мин при скорости 6 м/с в настольном гомогенизаторе, сжимая образец и удаляя надосадочную жидкость после каждой промывки.

  2. Добавьте к образцу свежую аликвоту 2 мл/г 0,075 М буфера цитрата натрия.

  3. Выполните 6 последовательных циклов перемешивания в настольном гомогенизаторе со скоростью 1 мин и 6 м/с без удаления буфера между каждым циклом.

  4. Перенесите густой прозрачный супернатант в пробирку для сбора.

  5. Добавить дополнительно 1 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия к образцу и выполнить последний цикл перемешивания настольного гомогенизатора.

  6. Добавьте этот последний супернатант в пробирку для сбора.

  7. Пробирку для сбора отцентрифугировать при 3200 g в течение 10 мин при 4 °C.

  8. Перенесите супернатант в верхний отсек центробежного фильтрующего устройства с отсечкой по молекулярной массе 100 000.

  9. Центрифуга при 3200 g в течение 30 мин при 4 °C.

  10. Перенесите очищенный COL1 из верхнего отсека в чистую коническую пробирку и храните при 4 °C.

Репрезентативные результаты

Этот протокол изоляции COL1 требует около 2 часов 15 минут для завершения. На рис. 1 показана схема, на которой показаны основные этапы этой процедуры. Подготовка образца и выполнение 7 циклов высокоскоростного перемешивания и промывания ацетатом натрия занимает приблизительно 35 минут 90 045 (Рисунки 1A-C) . Выполнение одного цикла перемешивания и промывки с dH 2 O занимает приблизительно 5 минут (рисунки 1D и 1E) .Добавление цитрата натрия и выполнение одного цикла взбалтывания и ополаскивания образца с последующими 6 циклами перемешивания занимает приблизительно 45 минут (рисунки 1F и 1G) . Центрифугирование оставшихся твердых веществ из жидкого экстракта занимает 15 мин 90 045 (рис. 1H) . Наконец, перенос образца в фильтрующее устройство и выполнение еще одного этапа центрифугирования для концентрирования очищенного, солюбилизированного COL1 и удаления мелких белков занимает 30 минут (рисунки 1I и 1J) .Конечный продукт представляет собой концентрированный высокочистый препарат растворимого COL1, который может быть подвергнут дальнейшей полимеризации путем добавления Na 2 HCO 3 и инкубации при 37°C. Изображения фазово-контрастной микроскопии этого отвержденного продукта показывают фибриллы COL1, которые могут служить субстратом для прикрепления клеток к планшетам для тканевых культур или использоваться в качестве каркаса для трехмерных приложений тканевой инженерии (рисунки 2A и 2B) .

Рис. 1. Схематический обзор улучшенного метода выделения COL1.A ) Срезы дермы добавляют в коническую пробирку на 50 мл. B ) К образцу добавляют 0,5 М ацетата натрия. C ) Образец подвергают 7 циклам взбалтывания с заменой ацетатно-натриевого буфера после каждого цикла. D ) dH 2 О добавляют к образцу кожи. E ) Препарат подвергают 1 циклу встряхивания и сливают dH 2 O. F ) К пробе добавляют 0,075 М цитрата натрия. G ) Образец подвергают 6 циклам встряхивания. H ) Образец центрифугируют для удаления крупных твердых частиц. I ) Супернатант переносят в центробежный фильтр с отсечением по молекулярной массе 100000 в конической пробирке. J ) Это устройство центрифугируют и собирают вязкую жидкость, оставшуюся в верхнем отсеке.

Рис. 2. Быстрое выделение из дермы для получения COL1, полимеризованного в фибриллы. Растворимый COL1 нейтрализовали добавлением Na 2 HCO 3 и затем инкубировали при 37 °C.Фазово-контрастное изображение ( A ) и просвечивающая электронная микрофотография (показывающая сохранившуюся d-полосу) ( B ) фибрилл COL1, полученных с использованием нашего метода быстрой изоляции. Шкала баров = 10 мкм и 500 нм (соответственно). Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенное изображение.

Обсуждение

Важнейшим компонентом этого метода является повторное эффективное сжатие образца кожи для удаления избыточной жидкости. Крайне важно удалить как можно больше ацетата натрия на этапе 2.5, сжимая образец.Мы используем шпатель, чтобы прижать кожу к стенке тюбика; однако можно также использовать марлю, хотя это потребует удаления образца из пробирки и увеличит время, необходимое для выполнения этих шагов. Точно так же важно сжать образец на шаге 3.1, чтобы объем цитрата натрия был точным на последующих этапах экстракции. Отсутствие надлежащего удаления жидкости из образца на любом из этих этапов отрицательно скажется на конечном выходе COL1.Еще одним ключевым компонентом этого протокола является поддержание всех реагентов при 4 градусах Цельсия. Это обеспечивает эффективную экстракцию растворимого в кислоте COL1 и предотвращает затвердевание коллагена. Кроме того, процедуру можно проводить с использованием всех стерильных реагентов в стерильной среде. Это будет иметь особое значение для тех, кто хочет использовать этот метод для выделения COL1 для использования у людей. Многие коммерческие источники COL1 были эффективно стерилизованы гамма-облучением. К сожалению, эта практика значительно снижает его способность образовывать гели из-за фрагментации и денатурации белка 9,10 .

Эта процедура представляет собой оптимальные условия для экстракции COL1, что было определено в ходе многих экспериментов, проведенных для установления идеального соотношения образца кожи к объему буфера. Добавление большего количества пробирок предлагается, когда исследователь хочет использовать эту процедуру для больших образцов кожи. Исходя из нашего опыта, не рекомендуется добавлять больше образца или буфера, чем указано для каждой пробирки. Также стоит отметить, что шарики, состоящие из кремнезема, керамики, граната, оксида алюминия, карбида кремния или оксида циркония, которые обычно используются в сочетании с настольными гомогенизаторами, исключены из нашей процедуры.6 последовательных 1-минутных циклов перемешивания, описанных в шаге 3.3, необходимы из-за ограничения, накладываемого нашим оборудованием для перемешивания. Мы можем перемешивать образец только в течение 60 секунд за один раз, после чего машина требует остановки. Если у вас есть оборудование, которое можно настроить на 6 минут подряд, было бы неплохо переключиться на один шестиминутный цикл. Тем не менее, мы предлагаем строго соблюдать указанный вес образца и объемы буфера.

Мы обнаружили, что этот метод подготовки эффективно выделяет растворимый COL1 из образцов кожи ягненка, кролика и человека 8 .С другой стороны, этот протокол не был успешным при очистке COL1 из образцов кожи свиньи. Даже после обширных модификаций метода дерма свиньи производила чрезмерное количество пены из-за остаточных липидов и жира, что приводило к неэффективной экстракции COL1. И наоборот, COL1 можно выделить из цельных крысиных хвостов или изолированных сухожилий крысиных хвостов с использованием слегка модифицированного препарата, включающего гранулы лизирующего матрикса. Это было подробно описано ранее 8 .

Для ученых-исследователей потенциальное использование конечного солюбилизированного в кислоте продукта COL1, полученного с помощью этого метода, включает: 3-мерная (2- или 3-D) клеточная культура и c) создание 3-D каркасов для приложений тканевой инженерии.Хотя от любого метода очистки следует ожидать некоторой небольшой изменчивости от партии к партии, мы обнаружили, что эти жидкие препараты COL1 неизменно можно комбинировать с различными клеточными популяциями и отливать в формы. После нейтрализации рН и нагревания в результате получается затвердевшая искусственная ткань с пространственно ориентированными клетками, равномерно распределенными по всей матрице. В зависимости от формы формы эти конструкции могут быть изготовлены практически любой формы и размера 3,4,11-14 .

Таким образом, мы считаем, что наиболее убедительная причина для использования этого метода заключается в том, что он значительно сокращает время и усилия, необходимые для выделения высокочистого растворимого COL1 из источника аутологичной ткани, такого как небольшие биопсии кожи. Метод основан на давно зарекомендовавших себя процедурах и дает продукт, который соответствует или превосходит качество дорогих коммерческих препаратов в отношении чистоты COL1 и способности формировать стабильные трехмерные ткани. В то же время этот упрощенный метод позволяет эффективно и быстро выделять COL1 аутологичного происхождения, который можно безопасно использовать для множества клинических применений.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конкурирующих финансовых интересов для раскрытия.

Благодарности

Эта работа была поддержана исследовательским грантом от Национальных институтов здравоохранения (HL068915 для DBC), премией нового исследователя от исследовательского фонда Thrasher (для CAP), грантом в помощь от Американской кардиологической ассоциации (12GRNT11

8 для DBC), исследовательский грант от Фонда детского сердца (для DBC) и пожертвования в Фонд сердечной проводимости Бостонской детской больницы, Фонд семьи Райан и Дэвид Пуллман.

Ссылки

  • Nageotte J. Фибриллярная коагуляция in vitro дю коллаген dissous dans un acide dilué CR hebd. сеансы акад. Сей. 1927;184 [Google Scholar]
  • Schmitt FO, Hall CE, Jakus MA. Электронно-микроскопическое исследование структуры коллагена. J. Cell Comp. Физиол. 1942; 20:11–33. [Google Scholar]
  • Choi YH, et al. Сердечная проводимость через инженерную ткань. Являюсь. Дж. Патол. 2006; 169:72–85. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Pacak CA, Cowan DB.Изготовление миогенно-инженерных тканевых конструкций. Дж. Вис. Эксп. 2009. [Статья бесплатно PMC] [PubMed]
  • Cliche S, Amiot J, Avezard C, Gariepy C. Извлечение и характеристика коллагена с телопептидами или без них из куриной кожи. наук о птицеводстве. 2003; 82: 503–509. [PubMed] [Google Scholar]
  • Rajan N, Habermehl J, Cote MF, Doillon CJ, Mantovani D. Подготовка готового к использованию, хранения и восстановления коллагена типа I из сухожилия хвоста крысы для применения в тканевой инженерии.Нац. протокол 2006; 1: 2753–2758. [PubMed] [Google Scholar]
  • Seifter S, Gallop P. Получение и свойства растворимых коллагенов. В: Коловик С., Каплан Н., редакторы. Методы в энзимологии. Нью-Йорк: Академическая пресса; 1963. [Google Scholar]
  • Pacak CA, Powers JM, Cowan DB. Сверхбыстрая очистка коллагена I типа для применения в тканевой инженерии. Ткань англ. Методы части С. 2011; 17: 879–885. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Ohan MP, Dunn MG. Глюкоза стабилизирует коллаген, стерилизованный гамма-облучением.Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1188–1195. [PubMed] [Google Scholar]
  • Tyan YC, Liao JD, Lin SP, Chen CC. Изучение стерилизующего действия гамма-облучения поверхностей иммобилизованного коллагенового полипропиленового нетканого материала. Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1033–1043. [PubMed] [Google Scholar]
  • Ber S, Torun Kose G, Hasirci V. Инженерия костной ткани на узорчатых коллагеновых пленках: исследование in vitro. Биоматериалы. 2005; 26:1977–1986. [PubMed] [Google Scholar]
  • Liu Y, Sun S, Singha S, Cho MR, Gordon RJ.Трехмерное фемтосекундное лазерное моделирование коллагена для направленного прикрепления клеток. Биоматериалы. 2005; 26:4597–4605. [PubMed] [Google Scholar]
  • Thakar RG, Ho F, Huang NF, Liepmann D, Li S. Регуляция гладкомышечных клеток сосудов с помощью микроструктурирования. Биохим. Биофиз. Рез. Комм. 2003; 307: 883–890. [PubMed] [Google Scholar]
  • Лейтон Дж., Джаст Г., Эспер М., Кроненталь Р.Л. Губка из целлюлозы с коллагеновым покрытием: трехмерная матрица для культуры ткани опухоли Уокера 256. Наука. 1967; 155: 1259–1261.[PubMed] [Google Scholar]

Улучшенный метод получения коллагена типа I из кожи

J Vis Exp. 2014; (83): 51011.

Кристина А. PACAK

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и боли медицина, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

Allison A. Mackay

1 Отделение анестезиологии, периоперационной и обезболивающей медицины, Бостонская детская больница

Дуглас Б.Cowan

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и болитной медицины, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

1 Департамент анестезиологии, Периоперативная и болевая медицина, Бостон Детская больница

2 Кафедра анестезии Гарвардской медицинской школы

Copyright © 2014, Journal of Visualized ExperimentsЭта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Растворимый коллаген 1 типа (COL1) широко используется в качестве адгезивного субстрата для клеточных культур и в качестве клеточного каркаса для регенеративных применений. Клинически этот белок широко используется в косметической хирургии, кожных инъекциях, костной пластике и реконструктивной хирургии. Источниками COL1 для этих процедур обычно являются не люди, что увеличивает вероятность воспаления и отторжения, а также передачи ксенобиотических заболеваний. Ввиду этого метод эффективной и быстрой очистки COL1 из ограниченного количества аутологичных тканей позволил бы обойти многие из этих проблем; однако стандартные протоколы изоляции длительны и часто требуют большого количества коллагеновых тканей.Здесь мы демонстрируем эффективный метод экстракции COL1, который сокращает время, необходимое для выделения и очистки этого белка, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов. Мы выбрали дерму в качестве источника ткани из-за ее доступности во время многих хирургических процедур. В этом методе используются традиционные экстракционные буферы в сочетании с принудительным перемешиванием и центрифужной фильтрацией для получения высокочистого растворимого COL1 из небольшого количества кориума. Вкратце, кожные биоптаты тщательно промывают в ледяной воде dH 2 O после удаления жира, соединительной ткани и волос.Образцы кожи очищают от неколлагеновых белков и полисахаридов с использованием 0,5 М ацетата натрия и высокоскоростного настольного гомогенизатора. Коллаген из остаточных твердых веществ затем экстрагируют 0,075 М буфером цитрата натрия с использованием гомогенизатора. Эти экстракты очищают с использованием центробежных фильтров с отсечкой 100 000 МВт, что дает препараты COL1 сравнимого или превосходящего качества по сравнению с коммерческими продуктами или препаратами, полученными с использованием традиционных процедур. Мы ожидаем, что этот метод облегчит использование аутологично полученного COL1 для множества исследовательских и клинических приложений.

Ключевые слова: Биоинженерия, выпуск 83, коллаген 1 типа, внеклеточный матрикс, тканевая инженерия, каркасный белок, дерма, кориум кожи и сухожилий с использованием некоторого варианта простого протокола кислотной экстракции с последующей нейтрализацией, что приводит к ресуспендированию матрицы организованных фибрилл COL1, которые можно использовать для множества биомедицинских приложений 1-4 .Хотя существует много примеров клинического применения COL1, немногие из них используют аутологичный COL1, потому что подготовка этого белка требует длительных экстракций, занимающих дни или недели для выполнения 5-7 . В результате исследователи и врачи обычно используют дорогие коммерческие препараты COL1, которые готовят с использованием нечеловеческих тканей, таких как кориум крысы, крупного рогатого скота или свиньи, или с использованием кожи, снятой с трупов или после мужского обрезания. Для регенеративных применений многие из этих продуктов проявляют изменчивость в отношении их способности образовывать твердые матрицы или тканевые конструкции, способные поддерживать прикрепление и рост клеток.Следовательно, существует явная потребность в новом стандартизированном методе, предназначенном для быстрого извлечения COL1 из доступных и многочисленных источников аутологичных тканей.

Такой метод сэкономит время и деньги в исследовательских условиях, где COL1 можно будет извлечь из интересующей животной модели и использовать для доклинических испытаний искусственных тканей, собранных на каркасах на основе коллагена. В то же время возможность использования в клинике быстро выделенного аутологичного COL1 повысит общую безопасность для пациентов, которые в противном случае получали бы аллогенные или ксеногенные препараты.Для пациентов, получающих аутогенный препарат, этот упрощенный метод значительно сократит интервал между забором биопсии и нанесением коллагена. По этим причинам мы стремились улучшить давно зарекомендовавший себя метод выделения и очистки COL1, используя высокоскоростное перемешивание и центрифугирование с эксклюзией по размеру. Этот метод прост в исполнении с использованием стандартных буферов и оборудования, которые можно найти во многих лабораториях. Используя высокоскоростное перемешивание, наш протокол сокращает время, необходимое для выделения растворимого кожного COL1, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов 8 .Важно отметить, что этот метод может быть легко реализован в клинических условиях для подготовки аутологически полученного COL1 для использования у пациентов во время одного набора процедур.

Протокол

Здесь мы продемонстрируем выделение COL1 из кожи ягненка. Как написано, этот протокол также может быть использован для успешного выделения COL1 из кожи кролика и человека.

1. Подготовьте образец кожи

  1. Перед использованием уравновесьте все реагенты до 4 °C.

  2. Промойте образец кожи (25–50 г) в ледяной воде dH 2 O и удалите шерсть, мех или волосы с помощью крема для депиляции.

  3. Используйте однолезвийное лезвие, чтобы очистить образец от соединительной ткани и жира.

  4. Промойте образец в ледяной воде dH 2 O.

  5. Нарежьте образец кожи на кусочки размером 1 см x 1 см однолезвийным лезвием.

2. Удаление неколлагенового солюбилизированного материала

  1. Взвесьте 5 г образца на 50 мл коническую пробирку и добавьте 30 мл охлажденного льдом 0,5 М ацетата натрия.

  2. Смешивайте пробирки в течение 1 мин при скорости 6 м/с с помощью адаптера для пробирок на 50 мл в настольном гомогенизаторе.

  3. Удалите надосадочную жидкость и повторите в общей сложности 7 циклов промывки ацетатом натрия.

  4. Промойте образец ледяной водой dH 2 O и перемешайте один раз, чтобы удалить остатки ацетата натрия.

  5. С помощью шпателя прижмите образец к стенке пробирки, чтобы удалить лишнюю жидкость, а затем перенесите его в свежую коническую пробирку объемом 50 мл.

3. Экстракция коллагена типа I

  1. Промойте образец дважды в 2 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия в течение 1 мин при скорости 6 м/с в настольном гомогенизаторе, сжимая образец и удаляя надосадочную жидкость после каждой промывки.

  2. Добавьте к образцу свежую аликвоту 2 мл/г 0,075 М буфера цитрата натрия.

  3. Выполните 6 последовательных циклов перемешивания в настольном гомогенизаторе со скоростью 1 мин и 6 м/с без удаления буфера между каждым циклом.

  4. Перенесите густой прозрачный супернатант в пробирку для сбора.

  5. Добавить дополнительно 1 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия к образцу и выполнить последний цикл перемешивания настольного гомогенизатора.

  6. Добавьте этот последний супернатант в пробирку для сбора.

  7. Пробирку для сбора отцентрифугировать при 3200 g в течение 10 мин при 4 °C.

  8. Перенесите супернатант в верхний отсек центробежного фильтрующего устройства с отсечкой по молекулярной массе 100 000.

  9. Центрифуга при 3200 g в течение 30 мин при 4 °C.

  10. Перенесите очищенный COL1 из верхнего отсека в чистую коническую пробирку и храните при 4 °C.

Репрезентативные результаты

Этот протокол изоляции COL1 требует около 2 часов 15 минут для завершения. На рис. 1 показана схема, на которой показаны основные этапы этой процедуры. Подготовка образца и выполнение 7 циклов высокоскоростного перемешивания и промывания ацетатом натрия занимает приблизительно 35 минут 90 045 (Рисунки 1A-C) . Выполнение одного цикла перемешивания и промывки с dH 2 O занимает приблизительно 5 минут (рисунки 1D и 1E) .Добавление цитрата натрия и выполнение одного цикла взбалтывания и ополаскивания образца с последующими 6 циклами перемешивания занимает приблизительно 45 минут (рисунки 1F и 1G) . Центрифугирование оставшихся твердых веществ из жидкого экстракта занимает 15 мин 90 045 (рис. 1H) . Наконец, перенос образца в фильтрующее устройство и выполнение еще одного этапа центрифугирования для концентрирования очищенного, солюбилизированного COL1 и удаления мелких белков занимает 30 минут (рисунки 1I и 1J) .Конечный продукт представляет собой концентрированный высокочистый препарат растворимого COL1, который может быть подвергнут дальнейшей полимеризации путем добавления Na 2 HCO 3 и инкубации при 37°C. Изображения фазово-контрастной микроскопии этого отвержденного продукта показывают фибриллы COL1, которые могут служить субстратом для прикрепления клеток к планшетам для тканевых культур или использоваться в качестве каркаса для трехмерных приложений тканевой инженерии (рисунки 2A и 2B) .

Рис. 1. Схематический обзор улучшенного метода выделения COL1.A ) Срезы дермы добавляют в коническую пробирку на 50 мл. B ) К образцу добавляют 0,5 М ацетата натрия. C ) Образец подвергают 7 циклам взбалтывания с заменой ацетатно-натриевого буфера после каждого цикла. D ) dH 2 О добавляют к образцу кожи. E ) Препарат подвергают 1 циклу встряхивания и сливают dH 2 O. F ) К пробе добавляют 0,075 М цитрата натрия. G ) Образец подвергают 6 циклам встряхивания. H ) Образец центрифугируют для удаления крупных твердых частиц. I ) Супернатант переносят в центробежный фильтр с отсечением по молекулярной массе 100000 в конической пробирке. J ) Это устройство центрифугируют и собирают вязкую жидкость, оставшуюся в верхнем отсеке.

Рис. 2. Быстрое выделение из дермы для получения COL1, полимеризованного в фибриллы. Растворимый COL1 нейтрализовали добавлением Na 2 HCO 3 и затем инкубировали при 37 °C.Фазово-контрастное изображение ( A ) и просвечивающая электронная микрофотография (показывающая сохранившуюся d-полосу) ( B ) фибрилл COL1, полученных с использованием нашего метода быстрой изоляции. Шкала баров = 10 мкм и 500 нм (соответственно). Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенное изображение.

Обсуждение

Важнейшим компонентом этого метода является повторное эффективное сжатие образца кожи для удаления избыточной жидкости. Крайне важно удалить как можно больше ацетата натрия на этапе 2.5, сжимая образец.Мы используем шпатель, чтобы прижать кожу к стенке тюбика; однако можно также использовать марлю, хотя это потребует удаления образца из пробирки и увеличит время, необходимое для выполнения этих шагов. Точно так же важно сжать образец на шаге 3.1, чтобы объем цитрата натрия был точным на последующих этапах экстракции. Отсутствие надлежащего удаления жидкости из образца на любом из этих этапов отрицательно скажется на конечном выходе COL1.Еще одним ключевым компонентом этого протокола является поддержание всех реагентов при 4 градусах Цельсия. Это обеспечивает эффективную экстракцию растворимого в кислоте COL1 и предотвращает затвердевание коллагена. Кроме того, процедуру можно проводить с использованием всех стерильных реагентов в стерильной среде. Это будет иметь особое значение для тех, кто хочет использовать этот метод для выделения COL1 для использования у людей. Многие коммерческие источники COL1 были эффективно стерилизованы гамма-облучением. К сожалению, эта практика значительно снижает его способность образовывать гели из-за фрагментации и денатурации белка 9,10 .

Эта процедура представляет собой оптимальные условия для экстракции COL1, что было определено в ходе многих экспериментов, проведенных для установления идеального соотношения образца кожи к объему буфера. Добавление большего количества пробирок предлагается, когда исследователь хочет использовать эту процедуру для больших образцов кожи. Исходя из нашего опыта, не рекомендуется добавлять больше образца или буфера, чем указано для каждой пробирки. Также стоит отметить, что шарики, состоящие из кремнезема, керамики, граната, оксида алюминия, карбида кремния или оксида циркония, которые обычно используются в сочетании с настольными гомогенизаторами, исключены из нашей процедуры.6 последовательных 1-минутных циклов перемешивания, описанных в шаге 3.3, необходимы из-за ограничения, накладываемого нашим оборудованием для перемешивания. Мы можем перемешивать образец только в течение 60 секунд за один раз, после чего машина требует остановки. Если у вас есть оборудование, которое можно настроить на 6 минут подряд, было бы неплохо переключиться на один шестиминутный цикл. Тем не менее, мы предлагаем строго соблюдать указанный вес образца и объемы буфера.

Мы обнаружили, что этот метод подготовки эффективно выделяет растворимый COL1 из образцов кожи ягненка, кролика и человека 8 .С другой стороны, этот протокол не был успешным при очистке COL1 из образцов кожи свиньи. Даже после обширных модификаций метода дерма свиньи производила чрезмерное количество пены из-за остаточных липидов и жира, что приводило к неэффективной экстракции COL1. И наоборот, COL1 можно выделить из цельных крысиных хвостов или изолированных сухожилий крысиных хвостов с использованием слегка модифицированного препарата, включающего гранулы лизирующего матрикса. Это было подробно описано ранее 8 .

Для ученых-исследователей потенциальное использование конечного солюбилизированного в кислоте продукта COL1, полученного с помощью этого метода, включает: 3-мерная (2- или 3-D) клеточная культура и c) создание 3-D каркасов для приложений тканевой инженерии.Хотя от любого метода очистки следует ожидать некоторой небольшой изменчивости от партии к партии, мы обнаружили, что эти жидкие препараты COL1 неизменно можно комбинировать с различными клеточными популяциями и отливать в формы. После нейтрализации рН и нагревания в результате получается затвердевшая искусственная ткань с пространственно ориентированными клетками, равномерно распределенными по всей матрице. В зависимости от формы формы эти конструкции могут быть изготовлены практически любой формы и размера 3,4,11-14 .

Таким образом, мы считаем, что наиболее убедительная причина для использования этого метода заключается в том, что он значительно сокращает время и усилия, необходимые для выделения высокочистого растворимого COL1 из источника аутологичной ткани, такого как небольшие биопсии кожи. Метод основан на давно зарекомендовавших себя процедурах и дает продукт, который соответствует или превосходит качество дорогих коммерческих препаратов в отношении чистоты COL1 и способности формировать стабильные трехмерные ткани. В то же время этот упрощенный метод позволяет эффективно и быстро выделять COL1 аутологичного происхождения, который можно безопасно использовать для множества клинических применений.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конкурирующих финансовых интересов для раскрытия.

Благодарности

Эта работа была поддержана исследовательским грантом от Национальных институтов здравоохранения (HL068915 для DBC), премией нового исследователя от исследовательского фонда Thrasher (для CAP), грантом в помощь от Американской кардиологической ассоциации (12GRNT11

8 для DBC), исследовательский грант от Фонда детского сердца (для DBC) и пожертвования в Фонд сердечной проводимости Бостонской детской больницы, Фонд семьи Райан и Дэвид Пуллман.

Ссылки

  • Nageotte J. Фибриллярная коагуляция in vitro дю коллаген dissous dans un acide dilué CR hebd. сеансы акад. Сей. 1927;184 [Google Scholar]
  • Schmitt FO, Hall CE, Jakus MA. Электронно-микроскопическое исследование структуры коллагена. J. Cell Comp. Физиол. 1942; 20:11–33. [Google Scholar]
  • Choi YH, et al. Сердечная проводимость через инженерную ткань. Являюсь. Дж. Патол. 2006; 169:72–85. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Pacak CA, Cowan DB.Изготовление миогенно-инженерных тканевых конструкций. Дж. Вис. Эксп. 2009. [Статья бесплатно PMC] [PubMed]
  • Cliche S, Amiot J, Avezard C, Gariepy C. Извлечение и характеристика коллагена с телопептидами или без них из куриной кожи. наук о птицеводстве. 2003; 82: 503–509. [PubMed] [Google Scholar]
  • Rajan N, Habermehl J, Cote MF, Doillon CJ, Mantovani D. Подготовка готового к использованию, хранения и восстановления коллагена типа I из сухожилия хвоста крысы для применения в тканевой инженерии.Нац. протокол 2006; 1: 2753–2758. [PubMed] [Google Scholar]
  • Seifter S, Gallop P. Получение и свойства растворимых коллагенов. В: Коловик С., Каплан Н., редакторы. Методы в энзимологии. Нью-Йорк: Академическая пресса; 1963. [Google Scholar]
  • Pacak CA, Powers JM, Cowan DB. Сверхбыстрая очистка коллагена I типа для применения в тканевой инженерии. Ткань англ. Методы части С. 2011; 17: 879–885. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Ohan MP, Dunn MG. Глюкоза стабилизирует коллаген, стерилизованный гамма-облучением.Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1188–1195. [PubMed] [Google Scholar]
  • Tyan YC, Liao JD, Lin SP, Chen CC. Изучение стерилизующего действия гамма-облучения поверхностей иммобилизованного коллагенового полипропиленового нетканого материала. Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1033–1043. [PubMed] [Google Scholar]
  • Ber S, Torun Kose G, Hasirci V. Инженерия костной ткани на узорчатых коллагеновых пленках: исследование in vitro. Биоматериалы. 2005; 26:1977–1986. [PubMed] [Google Scholar]
  • Liu Y, Sun S, Singha S, Cho MR, Gordon RJ.Трехмерное фемтосекундное лазерное моделирование коллагена для направленного прикрепления клеток. Биоматериалы. 2005; 26:4597–4605. [PubMed] [Google Scholar]
  • Thakar RG, Ho F, Huang NF, Liepmann D, Li S. Регуляция гладкомышечных клеток сосудов с помощью микроструктурирования. Биохим. Биофиз. Рез. Комм. 2003; 307: 883–890. [PubMed] [Google Scholar]
  • Лейтон Дж., Джаст Г., Эспер М., Кроненталь Р.Л. Губка из целлюлозы с коллагеновым покрытием: трехмерная матрица для культуры ткани опухоли Уокера 256. Наука. 1967; 155: 1259–1261.[PubMed] [Google Scholar]

Улучшенный метод получения коллагена типа I из кожи

J Vis Exp. 2014; (83): 51011.

Кристина А. PACAK

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и боли медицина, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

Allison A. Mackay

1 Отделение анестезиологии, периоперационной и обезболивающей медицины, Бостонская детская больница

Дуглас Б.Cowan

1

1 Департамент анестезиологии, периоперационной и болитной медицины, Бостон Детская больница

2 Департамент анестезии, Гарвардская медицинская школа

1 Департамент анестезиологии, Периоперативная и болевая медицина, Бостон Детская больница

2 Кафедра анестезии Гарвардской медицинской школы

Copyright © 2014, Journal of Visualized ExperimentsЭта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Растворимый коллаген 1 типа (COL1) широко используется в качестве адгезивного субстрата для клеточных культур и в качестве клеточного каркаса для регенеративных применений. Клинически этот белок широко используется в косметической хирургии, кожных инъекциях, костной пластике и реконструктивной хирургии. Источниками COL1 для этих процедур обычно являются не люди, что увеличивает вероятность воспаления и отторжения, а также передачи ксенобиотических заболеваний. Ввиду этого метод эффективной и быстрой очистки COL1 из ограниченного количества аутологичных тканей позволил бы обойти многие из этих проблем; однако стандартные протоколы изоляции длительны и часто требуют большого количества коллагеновых тканей.Здесь мы демонстрируем эффективный метод экстракции COL1, который сокращает время, необходимое для выделения и очистки этого белка, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов. Мы выбрали дерму в качестве источника ткани из-за ее доступности во время многих хирургических процедур. В этом методе используются традиционные экстракционные буферы в сочетании с принудительным перемешиванием и центрифужной фильтрацией для получения высокочистого растворимого COL1 из небольшого количества кориума. Вкратце, кожные биоптаты тщательно промывают в ледяной воде dH 2 O после удаления жира, соединительной ткани и волос.Образцы кожи очищают от неколлагеновых белков и полисахаридов с использованием 0,5 М ацетата натрия и высокоскоростного настольного гомогенизатора. Коллаген из остаточных твердых веществ затем экстрагируют 0,075 М буфером цитрата натрия с использованием гомогенизатора. Эти экстракты очищают с использованием центробежных фильтров с отсечкой 100 000 МВт, что дает препараты COL1 сравнимого или превосходящего качества по сравнению с коммерческими продуктами или препаратами, полученными с использованием традиционных процедур. Мы ожидаем, что этот метод облегчит использование аутологично полученного COL1 для множества исследовательских и клинических приложений.

Ключевые слова: Биоинженерия, выпуск 83, коллаген 1 типа, внеклеточный матрикс, тканевая инженерия, каркасный белок, дерма, кориум кожи и сухожилий с использованием некоторого варианта простого протокола кислотной экстракции с последующей нейтрализацией, что приводит к ресуспендированию матрицы организованных фибрилл COL1, которые можно использовать для множества биомедицинских приложений 1-4 .Хотя существует много примеров клинического применения COL1, немногие из них используют аутологичный COL1, потому что подготовка этого белка требует длительных экстракций, занимающих дни или недели для выполнения 5-7 . В результате исследователи и врачи обычно используют дорогие коммерческие препараты COL1, которые готовят с использованием нечеловеческих тканей, таких как кориум крысы, крупного рогатого скота или свиньи, или с использованием кожи, снятой с трупов или после мужского обрезания. Для регенеративных применений многие из этих продуктов проявляют изменчивость в отношении их способности образовывать твердые матрицы или тканевые конструкции, способные поддерживать прикрепление и рост клеток.Следовательно, существует явная потребность в новом стандартизированном методе, предназначенном для быстрого извлечения COL1 из доступных и многочисленных источников аутологичных тканей.

Такой метод сэкономит время и деньги в исследовательских условиях, где COL1 можно будет извлечь из интересующей животной модели и использовать для доклинических испытаний искусственных тканей, собранных на каркасах на основе коллагена. В то же время возможность использования в клинике быстро выделенного аутологичного COL1 повысит общую безопасность для пациентов, которые в противном случае получали бы аллогенные или ксеногенные препараты.Для пациентов, получающих аутогенный препарат, этот упрощенный метод значительно сократит интервал между забором биопсии и нанесением коллагена. По этим причинам мы стремились улучшить давно зарекомендовавший себя метод выделения и очистки COL1, используя высокоскоростное перемешивание и центрифугирование с эксклюзией по размеру. Этот метод прост в исполнении с использованием стандартных буферов и оборудования, которые можно найти во многих лабораториях. Используя высокоскоростное перемешивание, наш протокол сокращает время, необходимое для выделения растворимого кожного COL1, примерно с 10 дней до менее чем 3 часов 8 .Важно отметить, что этот метод может быть легко реализован в клинических условиях для подготовки аутологически полученного COL1 для использования у пациентов во время одного набора процедур.

Протокол

Здесь мы продемонстрируем выделение COL1 из кожи ягненка. Как написано, этот протокол также может быть использован для успешного выделения COL1 из кожи кролика и человека.

1. Подготовьте образец кожи

  1. Перед использованием уравновесьте все реагенты до 4 °C.

  2. Промойте образец кожи (25–50 г) в ледяной воде dH 2 O и удалите шерсть, мех или волосы с помощью крема для депиляции.

  3. Используйте однолезвийное лезвие, чтобы очистить образец от соединительной ткани и жира.

  4. Промойте образец в ледяной воде dH 2 O.

  5. Нарежьте образец кожи на кусочки размером 1 см x 1 см однолезвийным лезвием.

2. Удаление неколлагенового солюбилизированного материала

  1. Взвесьте 5 г образца на 50 мл коническую пробирку и добавьте 30 мл охлажденного льдом 0,5 М ацетата натрия.

  2. Смешивайте пробирки в течение 1 мин при скорости 6 м/с с помощью адаптера для пробирок на 50 мл в настольном гомогенизаторе.

  3. Удалите надосадочную жидкость и повторите в общей сложности 7 циклов промывки ацетатом натрия.

  4. Промойте образец ледяной водой dH 2 O и перемешайте один раз, чтобы удалить остатки ацетата натрия.

  5. С помощью шпателя прижмите образец к стенке пробирки, чтобы удалить лишнюю жидкость, а затем перенесите его в свежую коническую пробирку объемом 50 мл.

3. Экстракция коллагена типа I

  1. Промойте образец дважды в 2 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия в течение 1 мин при скорости 6 м/с в настольном гомогенизаторе, сжимая образец и удаляя надосадочную жидкость после каждой промывки.

  2. Добавьте к образцу свежую аликвоту 2 мл/г 0,075 М буфера цитрата натрия.

  3. Выполните 6 последовательных циклов перемешивания в настольном гомогенизаторе со скоростью 1 мин и 6 м/с без удаления буфера между каждым циклом.

  4. Перенесите густой прозрачный супернатант в пробирку для сбора.

  5. Добавить дополнительно 1 мл/г 0.075 М буфера цитрата натрия к образцу и выполнить последний цикл перемешивания настольного гомогенизатора.

  6. Добавьте этот последний супернатант в пробирку для сбора.

  7. Пробирку для сбора отцентрифугировать при 3200 g в течение 10 мин при 4 °C.

  8. Перенесите супернатант в верхний отсек центробежного фильтрующего устройства с отсечкой по молекулярной массе 100 000.

  9. Центрифуга при 3200 g в течение 30 мин при 4 °C.

  10. Перенесите очищенный COL1 из верхнего отсека в чистую коническую пробирку и храните при 4 °C.

Репрезентативные результаты

Этот протокол изоляции COL1 требует около 2 часов 15 минут для завершения. На рис. 1 показана схема, на которой показаны основные этапы этой процедуры. Подготовка образца и выполнение 7 циклов высокоскоростного перемешивания и промывания ацетатом натрия занимает приблизительно 35 минут 90 045 (Рисунки 1A-C) . Выполнение одного цикла перемешивания и промывки с dH 2 O занимает приблизительно 5 минут (рисунки 1D и 1E) .Добавление цитрата натрия и выполнение одного цикла взбалтывания и ополаскивания образца с последующими 6 циклами перемешивания занимает приблизительно 45 минут (рисунки 1F и 1G) . Центрифугирование оставшихся твердых веществ из жидкого экстракта занимает 15 мин 90 045 (рис. 1H) . Наконец, перенос образца в фильтрующее устройство и выполнение еще одного этапа центрифугирования для концентрирования очищенного, солюбилизированного COL1 и удаления мелких белков занимает 30 минут (рисунки 1I и 1J) .Конечный продукт представляет собой концентрированный высокочистый препарат растворимого COL1, который может быть подвергнут дальнейшей полимеризации путем добавления Na 2 HCO 3 и инкубации при 37°C. Изображения фазово-контрастной микроскопии этого отвержденного продукта показывают фибриллы COL1, которые могут служить субстратом для прикрепления клеток к планшетам для тканевых культур или использоваться в качестве каркаса для трехмерных приложений тканевой инженерии (рисунки 2A и 2B) .

Рис. 1. Схематический обзор улучшенного метода выделения COL1.A ) Срезы дермы добавляют в коническую пробирку на 50 мл. B ) К образцу добавляют 0,5 М ацетата натрия. C ) Образец подвергают 7 циклам взбалтывания с заменой ацетатно-натриевого буфера после каждого цикла. D ) dH 2 О добавляют к образцу кожи. E ) Препарат подвергают 1 циклу встряхивания и сливают dH 2 O. F ) К пробе добавляют 0,075 М цитрата натрия. G ) Образец подвергают 6 циклам встряхивания. H ) Образец центрифугируют для удаления крупных твердых частиц. I ) Супернатант переносят в центробежный фильтр с отсечением по молекулярной массе 100000 в конической пробирке. J ) Это устройство центрифугируют и собирают вязкую жидкость, оставшуюся в верхнем отсеке.

Рис. 2. Быстрое выделение из дермы для получения COL1, полимеризованного в фибриллы. Растворимый COL1 нейтрализовали добавлением Na 2 HCO 3 и затем инкубировали при 37 °C.Фазово-контрастное изображение ( A ) и просвечивающая электронная микрофотография (показывающая сохранившуюся d-полосу) ( B ) фибрилл COL1, полученных с использованием нашего метода быстрой изоляции. Шкала баров = 10 мкм и 500 нм (соответственно). Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенное изображение.

Обсуждение

Важнейшим компонентом этого метода является повторное эффективное сжатие образца кожи для удаления избыточной жидкости. Крайне важно удалить как можно больше ацетата натрия на этапе 2.5, сжимая образец.Мы используем шпатель, чтобы прижать кожу к стенке тюбика; однако можно также использовать марлю, хотя это потребует удаления образца из пробирки и увеличит время, необходимое для выполнения этих шагов. Точно так же важно сжать образец на шаге 3.1, чтобы объем цитрата натрия был точным на последующих этапах экстракции. Отсутствие надлежащего удаления жидкости из образца на любом из этих этапов отрицательно скажется на конечном выходе COL1.Еще одним ключевым компонентом этого протокола является поддержание всех реагентов при 4 градусах Цельсия. Это обеспечивает эффективную экстракцию растворимого в кислоте COL1 и предотвращает затвердевание коллагена. Кроме того, процедуру можно проводить с использованием всех стерильных реагентов в стерильной среде. Это будет иметь особое значение для тех, кто хочет использовать этот метод для выделения COL1 для использования у людей. Многие коммерческие источники COL1 были эффективно стерилизованы гамма-облучением. К сожалению, эта практика значительно снижает его способность образовывать гели из-за фрагментации и денатурации белка 9,10 .

Эта процедура представляет собой оптимальные условия для экстракции COL1, что было определено в ходе многих экспериментов, проведенных для установления идеального соотношения образца кожи к объему буфера. Добавление большего количества пробирок предлагается, когда исследователь хочет использовать эту процедуру для больших образцов кожи. Исходя из нашего опыта, не рекомендуется добавлять больше образца или буфера, чем указано для каждой пробирки. Также стоит отметить, что шарики, состоящие из кремнезема, керамики, граната, оксида алюминия, карбида кремния или оксида циркония, которые обычно используются в сочетании с настольными гомогенизаторами, исключены из нашей процедуры.6 последовательных 1-минутных циклов перемешивания, описанных в шаге 3.3, необходимы из-за ограничения, накладываемого нашим оборудованием для перемешивания. Мы можем перемешивать образец только в течение 60 секунд за один раз, после чего машина требует остановки. Если у вас есть оборудование, которое можно настроить на 6 минут подряд, было бы неплохо переключиться на один шестиминутный цикл. Тем не менее, мы предлагаем строго соблюдать указанный вес образца и объемы буфера.

Мы обнаружили, что этот метод подготовки эффективно выделяет растворимый COL1 из образцов кожи ягненка, кролика и человека 8 .С другой стороны, этот протокол не был успешным при очистке COL1 из образцов кожи свиньи. Даже после обширных модификаций метода дерма свиньи производила чрезмерное количество пены из-за остаточных липидов и жира, что приводило к неэффективной экстракции COL1. И наоборот, COL1 можно выделить из цельных крысиных хвостов или изолированных сухожилий крысиных хвостов с использованием слегка модифицированного препарата, включающего гранулы лизирующего матрикса. Это было подробно описано ранее 8 .

Для ученых-исследователей потенциальное использование конечного солюбилизированного в кислоте продукта COL1, полученного с помощью этого метода, включает: 3-мерная (2- или 3-D) клеточная культура и c) создание 3-D каркасов для приложений тканевой инженерии.Хотя от любого метода очистки следует ожидать некоторой небольшой изменчивости от партии к партии, мы обнаружили, что эти жидкие препараты COL1 неизменно можно комбинировать с различными клеточными популяциями и отливать в формы. После нейтрализации рН и нагревания в результате получается затвердевшая искусственная ткань с пространственно ориентированными клетками, равномерно распределенными по всей матрице. В зависимости от формы формы эти конструкции могут быть изготовлены практически любой формы и размера 3,4,11-14 .

Таким образом, мы считаем, что наиболее убедительная причина для использования этого метода заключается в том, что он значительно сокращает время и усилия, необходимые для выделения высокочистого растворимого COL1 из источника аутологичной ткани, такого как небольшие биопсии кожи. Метод основан на давно зарекомендовавших себя процедурах и дает продукт, который соответствует или превосходит качество дорогих коммерческих препаратов в отношении чистоты COL1 и способности формировать стабильные трехмерные ткани. В то же время этот упрощенный метод позволяет эффективно и быстро выделять COL1 аутологичного происхождения, который можно безопасно использовать для множества клинических применений.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конкурирующих финансовых интересов для раскрытия.

Благодарности

Эта работа была поддержана исследовательским грантом от Национальных институтов здравоохранения (HL068915 для DBC), премией нового исследователя от исследовательского фонда Thrasher (для CAP), грантом в помощь от Американской кардиологической ассоциации (12GRNT11

8 для DBC), исследовательский грант от Фонда детского сердца (для DBC) и пожертвования в Фонд сердечной проводимости Бостонской детской больницы, Фонд семьи Райан и Дэвид Пуллман.

Ссылки

  • Nageotte J. Фибриллярная коагуляция in vitro дю коллаген dissous dans un acide dilué CR hebd. сеансы акад. Сей. 1927;184 [Google Scholar]
  • Schmitt FO, Hall CE, Jakus MA. Электронно-микроскопическое исследование структуры коллагена. J. Cell Comp. Физиол. 1942; 20:11–33. [Google Scholar]
  • Choi YH, et al. Сердечная проводимость через инженерную ткань. Являюсь. Дж. Патол. 2006; 169:72–85. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Pacak CA, Cowan DB.Изготовление миогенно-инженерных тканевых конструкций. Дж. Вис. Эксп. 2009. [Статья бесплатно PMC] [PubMed]
  • Cliche S, Amiot J, Avezard C, Gariepy C. Извлечение и характеристика коллагена с телопептидами или без них из куриной кожи. наук о птицеводстве. 2003; 82: 503–509. [PubMed] [Google Scholar]
  • Rajan N, Habermehl J, Cote MF, Doillon CJ, Mantovani D. Подготовка готового к использованию, хранения и восстановления коллагена типа I из сухожилия хвоста крысы для применения в тканевой инженерии.Нац. протокол 2006; 1: 2753–2758. [PubMed] [Google Scholar]
  • Seifter S, Gallop P. Получение и свойства растворимых коллагенов. В: Коловик С., Каплан Н., редакторы. Методы в энзимологии. Нью-Йорк: Академическая пресса; 1963. [Google Scholar]
  • Pacak CA, Powers JM, Cowan DB. Сверхбыстрая очистка коллагена I типа для применения в тканевой инженерии. Ткань англ. Методы части С. 2011; 17: 879–885. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Ohan MP, Dunn MG. Глюкоза стабилизирует коллаген, стерилизованный гамма-облучением.Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1188–1195. [PubMed] [Google Scholar]
  • Tyan YC, Liao JD, Lin SP, Chen CC. Изучение стерилизующего действия гамма-облучения поверхностей иммобилизованного коллагенового полипропиленового нетканого материала. Дж. Биомед. Матер. Рез. А. 2003; 67: 1033–1043. [PubMed] [Google Scholar]
  • Ber S, Torun Kose G, Hasirci V. Инженерия костной ткани на узорчатых коллагеновых пленках: исследование in vitro. Биоматериалы. 2005; 26:1977–1986. [PubMed] [Google Scholar]
  • Liu Y, Sun S, Singha S, Cho MR, Gordon RJ.Трехмерное фемтосекундное лазерное моделирование коллагена для направленного прикрепления клеток. Биоматериалы. 2005; 26:4597–4605. [PubMed] [Google Scholar]
  • Thakar RG, Ho F, Huang NF, Liepmann D, Li S. Регуляция гладкомышечных клеток сосудов с помощью микроструктурирования. Биохим. Биофиз. Рез. Комм. 2003; 307: 883–890. [PubMed] [Google Scholar]
  • Лейтон Дж., Джаст Г., Эспер М., Кроненталь Р.Л. Губка из целлюлозы с коллагеновым покрытием: трехмерная матрица для культуры ткани опухоли Уокера 256. Наука. 1967; 155: 1259–1261.[PubMed] [Google Scholar]

Получение готового к использованию, хранимого и реконструированного коллагена типа I из сухожилия хвоста крысы для применения в тканевой инженерии

  • Berglund, J.D., Mohseni, MM, Nerem, R.M. и Самбанис, А. Биологическая гибридная модель для тканевых инженерных сосудистых конструкций на основе коллагена. Биоматериалы 24 , 1241–1254 (2003).

    КАС Статья Google ученый

  • Пурна, С.К. и Бабу, М. Повязки на основе коллагена – обзор. Бернс 26 , 54–62 (2000).

    КАС Статья Google ученый

  • Уоллес Д.Г. & Rosenblatt, J. Коллагеновые гелевые системы для устойчивой доставки и тканевой инженерии. Доп. Наркотик Делив. 55 , 1631–1649 (2003 г.).

    КАС Статья Google ученый

  • Сионковская А.и Каминска, А. Термический переход спираль-клубок в облученном УФ-излучением коллагене из сухожилия хвоста крысы. Междунар. Дж. Биол. макромол. 24 , 337–340 (1999).

    КАС Статья Google ученый

  • Стивен, Ф.С. и Тристрам, Г.Р. Наличие небелкового азота в растворимом в уксусной кислоте коллагене телячьей кожи. Биохим. J. 83 , 240–244 (1962).

    КАС Статья Google ученый

  • Серебро, F.H. & Trelstad, RL Коллаген типа I в растворе. Строение и свойства фрагментов фибрилл. J. Biol. хим. 255 , 9427–9433 (1980).

    КАС пабмед Google ученый

  • Вуд, Г.К. Неоднородность растворов коллагена и ее влияние на образование фибрилл. Биохим. J. 84 , 429–435 (1962).

    КАС Статья Google ученый

  • Гросс, Дж., Хайбергер, Дж.Х. и Шмитт, Ф.О. Экстракция коллагена из соединительной ткани нейтральными солевыми растворами. Проц. Натл. акад. науч. США 41 , 1–7 (1955).

    КАС Статья Google ученый

  • Habermehl, J. et al. Приготовление готового к использованию, запасаемого и восстановленного коллагена. Макромоль. Бионауч. 5 , 821–828 (2005).

    КАС Статья Google ученый

  • Боккафоски, Ф., Хабермель Дж., Весентини С. и Мантовани Д. Биологические характеристики каркасов на основе коллагена для инженерии сосудистой ткани. Биоматериалы 26 , 7410–7417 (2005).

    КАС Статья Google ученый

  • Sionkowska, A. Исследования импульсного фотолиза и импульсного радиолиза коллагена I типа в растворе уксусной кислоты. J. Photochem. Фотобиол. B 84 , 38–45 (2006).

    КАС Статья Google ученый

  • Элсдейл, Т.и Бард, Дж. Коллагеновые субстраты для изучения поведения клеток. Дж. Сотовый. биол. 54 , 626–637 (1972).

    КАС Статья Google ученый

  • Bell, E., Ivarsson, B. & Merrill, C. Создание тканеподобной структуры путем сжатия коллагеновых решеток фибробластами человека с различным пролиферативным потенциалом in vitro . Проц. Натл. акад. науч. США 76 , 1274–1278 (1979).

    КАС Статья Google ученый

  • Weinberg, C.B. & Bell, E. Модель кровеносного сосуда, построенная из коллагена и культивированных сосудистых клеток. Наука 231 , 397–400 (1986).

    КАС Статья Google ученый

  • Дейл З., Миксик И. и Экхардт А. Подготовительные процедуры и оценка чистоты белков коллагена. Ж. Хроматогр. Б анал. Технол. Биомед. Жизнь наук. 790 , 245–275 (2003).

    КАС Статья Google ученый

  • Lee, CH, Singla, A. & Lee, Y. Биомедицинские применения коллагена. Междунар. Дж. Фарм. 221 , 1–22 (2001).

    КАС Статья Google ученый

  • Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка браузера на прием файлов cookie

    Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

    Обзор, применение, побочные эффекты, меры предосторожности, взаимодействие, дозировка и обзоры

    Alcock RD, Shaw GC, Tee N, Welvaert M, Burke LM.Мочевой гидроксипролин подходит только в качестве биомаркера для острого потребления, до 6 часов после приема белков коллагена у «свободно живущих», здоровых, активных мужчин. Int J Sport Nutr Exerc Metab. 2019;29(5):461-465. Посмотреть реферат.

    Аргиру С., Карлафти Э., Лампропулу-Адамиду К. и др. Влияние добавок кальция и витамина D с пептидами коллагена и без них на обмен костей у женщин в постменопаузе с остеопенией. J Musculoskelet Нейрональное взаимодействие. 2020;20(1):12-17.Посмотреть аннотацию.

    Ассерин Дж., Лати Э., Шиоя Т., Правитт Дж. Влияние пероральных добавок коллагеновых пептидов на влажность кожи и кожную коллагеновую сеть: данные модели ex vivo и рандомизированных плацебо-контролируемых клинических испытаний. J Космет Дерматол. 2015;14(4):291-301. Посмотреть реферат.

    Багери Мияб К., Алипур Э., Вагардуст Р. и др. Влияние добавки на основе гидролизованного коллагена на заживление ран у пациентов с ожогами: рандомизированное двойное слепое пилотное клиническое исследование. Бернс.2020;46(1):156-163. Посмотреть реферат.

    Бенито-Руис П., Камачо-Самбрано М.М., Каррильо-Арсенталес Дж.Н. и др. Рандомизированное контролируемое исследование эффективности и безопасности пищевого ингредиента, гидролизата коллагена, для улучшения комфорта суставов. Int J Food Sci Nutr. 2009; 60 Дополнение 2:99-113. Посмотреть реферат.

    Брюйер О., Зегельс Б., Леонори Л. и др. Эффект гидролизата коллагена при боли в суставах: 6-месячное рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Дополнение Ther Med. 2012 июнь;20(3):124-30.Посмотреть реферат.

    Чой С.Ю., Ким В.Г., Ко Э.Дж. и др. Влияние трипептида с высоким содержанием передового коллагена на заживление ран и восстановление кожи после фракционного фототермолиза. Клин Эксп Дерматол. 2014;39(8):874-80. Посмотреть реферат.

    Clark KL, Sebastianelli W, Flechsenhar KR, et al. 24-недельное исследование использования гидролизата коллагена в качестве пищевой добавки у спортсменов с болью в суставах, связанной с физической активностью. Curr Med Res Opin. 2008;24(5):1485-96. Посмотреть реферат.

    Клиффорд Т., Вентресс М., Аллертон Д.М. и др.Влияние пептидов коллагена на повреждение мышц, воспаление и восстановление костной ткани после упражнений: рандомизированное контролируемое исследование. Аминокислоты 2019;51(4):691-704. Посмотреть реферат.

    Кунео Ф., Коста-Пайва Л., Пинто-Нето А.М., Мораис С.С., Амайя-Фарфан Дж. Влияние пищевых добавок с гидролизатами коллагена на костный метаболизм женщин в постменопаузе с низкой минеральной плотностью. Зрелые. 2010;65(3):253-7. Посмотреть реферат.

    Чайка А., Каниа Э.М., Дженовезе Л. и др. Ежедневный пероральный прием пептидов коллагена в сочетании с витаминами и другими биологически активными соединениями повышает эластичность кожи и благотворно влияет на состояние суставов и общее самочувствие.Nutr Res 2018; 57: 97-108. Посмотреть аннотацию.

    Де Лука С., Михальчик Е.В., Супрун М.В. и др. Антивозрастные и системные окислительно-восстановительные эффекты добавок с пептидами морского коллагена и антиоксидантами растительного происхождения: однократное слепое клиническое исследование методом случай-контроль. Оксид Мед Селл Лонгев. 2016;2016:4389410. Посмотреть реферат.

    Dressler P, Gehring D, Zdzieblik D, Oesser S, Gollhofer A, König D. Улучшение функциональных свойств голеностопного сустава после приема специальных пептидов коллагена у спортсменов с хронической нестабильностью голеностопного сустава.J Sports Sci Med. 2018;17(2):298-304. Посмотреть реферат.

    Elam ML, Johnson SA, Hooshmand S, et al. Пищевая добавка с хелатом кальция и коллагена уменьшает потерю костной массы у женщин в постменопаузе с остеопенией: рандомизированное контролируемое исследование. Джей Мед Фуд. 2015;18(3):324-31. Посмотреть реферат.

    Эванс М., Льюис Э.Д., Закария Н., Пелипягина Т., Гатри Н. Рандомизированное тройное слепое плацебо-контролируемое параллельное исследование по оценке эффективности пресноводного морского коллагена в отношении морщин и эластичности кожи.J Космет Дерматол. 2021;20(3):825-834. Посмотреть реферат.

    Хакута А., Ямагути Ю., Окава Т., Ямамото С., Сакаи Ю., Айхара М. Противовоспалительное действие трипептида коллагена при атопическом дерматите. J Дерматол Sci. 2017;88(3):357-364. Посмотреть реферат.

    Hexsel D, Zague V, Schunck M, Siega C, Camozzato FO, Oesser S. Пероральные добавки со специфическими биологически активными пептидами коллагена улучшают рост ногтей и уменьшают симптомы ломкости ногтей. J Космет Дерматол. 2017;16(4):520-526. Посмотреть реферат.

    Inoue N, Sugihara F, Wang X. Прием внутрь биоактивных гидролизатов коллагена повышает влажность и эластичность кожи лица и уменьшает признаки старения лица в рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом клиническом исследовании. J Sci Food Agric. 2016;96(12):4077-81. Посмотреть реферат.

    Ito N, Seki S, Ueda F. Влияние комплексной добавки, содержащей пептид коллагена и орнитин, на состояние кожи и уровень IGF-1 в плазме — рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Мар Наркотики.2018;16(12). пий: E482. Посмотреть реферат.

    Jendricke P, Centner C, Zdzieblik D, Gollhofer A, König D. Специфические пептиды коллагена в сочетании с тренировками с отягощениями улучшают состав тела и региональную мышечную силу у женщин в пременопаузе: рандомизированное контролируемое исследование. Питательные вещества. 2019;11(4). пий: E892. Посмотреть реферат.

    Jendricke P, Kohl J, Centner C, Gollhofer A, König D. Влияние определенных пептидов коллагена и одновременных тренировок на кардиометаболические параметры и показатели работоспособности у женщин: рандомизированное контролируемое исследование.Фронт Нутр. 2020;7:580918. Посмотреть реферат.

    Калман Д.С., Шварц Х.И., Пачон Дж., Шелдон Э., Алмада А.Л. Рандомизированное двойное слепое клиническое пилотное исследование по оценке безопасности и эффективности гидролизованного коллагена II типа у взрослых с остеоартритом. FASEB Experimental Biology 2004 Abstracts, Вашингтон, округ Колумбия, 17-21 апреля 2004 г.; А90.

    Ким Д.У., Чунг Х.К., Чой Дж., Сакаи Ю., Ли Б.И. Пероральный прием пептида коллагена с низким молекулярным весом улучшает увлажнение, эластичность и морщины кожи человека: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование.Питательные вещества. 2018;10(7).Посмотреть аннотацию.

    Коидзуми С., Иноуэ Н., Сугихара Ф., Игасе М. Влияние гидролизатов коллагена на структуру и когнитивные функции человеческого мозга: экспериментальное клиническое исследование. Питательные вещества. 2019;12(1):50. Посмотреть реферат.

    König D, Oesser S, Scharla S, Zdzieblik D, Gollhofer A. Специфические пептиды коллагена улучшают минеральную плотность костей и маркеры костей у женщин в постменопаузе — рандомизированное контролируемое исследование. Питательные вещества. 2018;10(1). пий: E97. Посмотреть реферат.

    Коугучи Т., Омори Т., Симидзу М. и др.Влияние гидролизата куриного коллагена на систему кровообращения у субъектов с легкой гипертонией или высоким нормальным кровяным давлением. Биоски Биотехнолог Биохим. 2013;77(4):691-6. Посмотреть реферат.

    Кумар С., Сугихара Ф., Судзуки К., Иноуэ Н., Венкатешваратирукумара С. Двойное слепое, плацебо-контролируемое, рандомизированное клиническое исследование эффективности пептида коллагена при остеоартрите. J Sci Food Agric. 2015;95(4):702-7. Посмотреть реферат.

    Lee SK, Posthauer ME, Dorner B, Redovian V, Maloney MJ.Заживление пролежней с помощью концентрированной обогащенной добавки гидролизата белка коллагена: рандомизированное контролируемое исследование. Уход за кожей Adv. 2006;19(2):92-6. Посмотреть реферат.

    База данных лицензированных натуральных продуктов для здоровья. Здоровье Канады. https://webprod5.hc-sc.gc.ca/lnhpd-bdpsnh/info.do?licence=80034311&lang=eng. Обновлено 27 февраля 2014 г. По состоянию на 15 января 2015 г.

    Lin P, Alexander RA, Liang CH, et al. Коллагеновая формула с Djulis для улучшения увлажненности кожи, яркости, текстуры, устранения морщин и содержания коллагена: двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое исследование.J Космет Дерматол. 2021;20(1):188-194. Посмотреть реферат.

    Лис Д.М., Баар К. Влияние различных производных коллагена, обогащенных витамином С, на синтез коллагена. Int J Sport Nutr Exerc Metab. 2019;29(5):526-531. Посмотреть реферат.

    Lopez HL, Ziegenfuss TN, Park J. Оценка воздействия коллагена BioCell, нового экстракта хряща, на поддержку соединительной ткани и функциональное восстановление после упражнений. Интегр Мед (Энсинитас). 2015;14(3):30-8. Посмотреть реферат.

    Московиц RW.Роль гидролизата коллагена в заболеваниях костей и суставов. Семин Артрит Реум. 2000;30(2):87-99. Посмотреть реферат.

    Московиц RW. Роль гидролизата коллагена в заболеваниях костей и суставов. Semin Arthritis Rheum 2000;30:87-99. Посмотреть реферат.

    Ойкава С.Ю., Камаль М.Дж., Уэбб Э.К., МакГлори С., Бейкер С.К., Филлипс С.М. Сывороточный белок, но не коллагеновые пептиды, стимулирует быстрый и долгосрочный синтез мышечного белка с упражнениями с отягощениями и без них у здоровых пожилых женщин: рандомизированное контролируемое исследование.Am J Clin Nutr. 2020;111(3):708-718. Посмотреть реферат.

    Оливьеро Ф., Рамонда Р., Ходжа А. и др. Влияние перорального препарата, содержащего гиалуроновую кислоту, хондроитинсульфат, гидролизованный коллаген типа II и гидролизованный кератин, на характеристики синовиальной жидкости и клинические показатели при остеоартрозе коленного сустава. Пилотное исследование. Ревматизм. 2020;72(3):125-130. Посмотреть реферат.

    Praet SFE, Purdam CR, Welvaert M, et al. Пероральный прием определенных коллагеновых пептидов в сочетании с упражнениями для укрепления икр улучшает функцию и уменьшает боль у пациентов с тендинопатией ахиллова сухожилия.Питательные вещества. 2019;11(1). пий: E76. Посмотреть реферат.

    Proksch E, Schunck M, Zague V, Segger D, Degwert J, Oesser S. Пероральный прием специфических биоактивных пептидов коллагена уменьшает морщины кожи и увеличивает синтез дермального матрикса. Skin Pharmacol Physiol. 2014;27(3):113-9. Посмотреть реферат.

    Prowting JL, Bemben D, Black CD, Day EA, Campbell JA. Влияние пептидов коллагена на восстановление после эксцентрических упражнений у мужчин, тренирующихся с отягощениями — пилотное исследование. Int J Sport Nutr Exerc Metab.2020:1-8. Посмотреть реферат.

    Сайга-Эгуса А., Иваи К., Хаякава Т., Такахата Ю., Моримацу Ф. Антигипертензивные эффекты и активация эндотелиальных клеток-предшественников при приеме гидролизата куриного коллагена при пред- и легкой гипертензии. Биоски Биотехнолог Биохим. 2009;73(2):422-4.

    Sangsuwan W, Asawanonda P. Четырехнедельный ежедневный прием перорального гидролизата коллагена приводит к улучшению эластичности кожи, особенно на участках, подверженных воздействию солнца: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование.J Дерматолог лечить. 2020:1-6. Посмотреть реферат.

    Schauss AG, Stenehjem J, Park J, Endres JR, Clewell A. Влияние нового низкомолекулярного гидролизованного экстракта куриного грудного хряща, BioCell Collagen, на улучшение симптомов, связанных с остеоартритом: рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование. пробный. J Agric Food Chem. 2012;60(16):4096-4101. Посмотреть реферат.

    Schunck M, Zague V, Oesser S, Proksch E. Пищевые добавки со специфическими пептидами коллагена оказывают положительное влияние на морфологию целлюлита в зависимости от индекса массы тела.Джей Мед Фуд. 2015;18(12):1340-8. Посмотреть реферат.

    Schwartz SR, Park J. Прием внутрь BioCell Collagen, нового гидролизованного экстракта куриного грудинного хряща; усиление микроциркуляции крови и уменьшение признаков старения лица. Clin Interv Старение. 2012;7:267-273. Посмотреть реферат.

    Шигемура Ю., Ивасаки Ю., Татено М. и др. Пилотное исследование по обнаружению циклического пролилгидроксипролина (Pro-Hyp) в крови человека после приема внутрь гидролизата коллагена. Питательные вещества 2018;10(10). пий: E1356.Посмотреть реферат.

    Сибилла С., Годфри М., Брюэр С., Будх-Раджа А., Дженовезе Л. Обзор благотворного влияния гидролизованного коллагена как нутрицевтика на свойства кожи: Научные предпосылки и клинические исследования. Open Neutraceut J. 2015; 8:29-42.

    Sugihara F, Inoue N, Venkateswarathirukumara S. Прием биоактивных гидролизатов коллагена ускоряет заживление пролежней в рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом клиническом исследовании. Научный доклад 2018; 8 (1): 11403. Посмотреть реферат.

    Tak YJ, Kim YJ, Lee JG и др. Влияние перорального приема низкомолекулярных пептидов коллагена, полученных из кожи ската (Raja Kenojei), на жировые отложения у взрослых с избыточным весом: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Мар Наркотики. 2019;17(3). пий: E157. Посмотреть реферат.

    Trc T, Bohmová J. Эффективность и переносимость ферментативного гидролизованного коллагена (EHC) по сравнению с сульфатом глюкозамина (GS) при лечении остеоартрита коленного сустава (KOA). Инт Ортоп. 2011;35(3):341-8. Посмотреть реферат.

    Ямамото С., Дегучи К., Онума М., Нумата Н., Сакаи Ю.Абсорбция и экскреция пептидов с мочой после приема внутрь трипептида коллагена у людей. Биол Фарм Бык. 2016;39(3):428-34. Посмотреть реферат.

    Zdzieblik D, Oesser S, Baumstark MW, Gollhofer A, König D. Прием коллагеновых пептидов в сочетании с тренировками с отягощениями улучшает состав тела и увеличивает мышечную силу у пожилых мужчин с саркопенией: рандомизированное контролируемое исследование. Бр Дж Нутр. 2015;114(8):1237-45. Посмотреть реферат.

    Здзиблик Д., Эссер С., Голльхофер А., Кениг Д.Уменьшение связанного с активностью дискомфорта в коленном суставе после приема специфических пептидов коллагена. Appl Physiol Nutr Metab. 2017;42(6):588-595. Посмотреть реферат.

    Zehra A, Burns J, Liu CK, et al. Зависимость от каннабиса и мозг: обзор. J Нейроиммунная Фармакол. 2018;13(4):438-52. Посмотреть реферат.

    Zhu CF, Li GZ, Peng HB, Zhang F, Chen Y, Li Y.